ATP敏感性钾通道(K)开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡及对PI3K/Akt/Bcl-2信号通路的影响

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目的:观察KATP通道开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡影响,并进一步探讨KATP通道开放剂对抗缺血缺氧后PC12细胞凋亡的信号转导机制,明确KATP通道开放剂是通过PI3K/Akt/Bcl—2信号转导通路来抑制凋亡,为KATP通道开放剂能尽早应用于临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。 方法:取传代后3d的PC12细胞,分为A组(正常对照组)、B组(缺血对照组)、C组(吡那地尔处理组)、D组(吡那地尔+格列吡嗪处理组)共4组。C组在PC12细胞缺血缺氧前20min加入浓度为100μmol.L-1的吡那地尔;D组则加入浓度100μmol.L的吡那地尔—1和浓度为500μmol.L-1的K ATP通道阻断剂格列吡嗪,采用Annexin—v FITC/PI双染流式细胞分析仪检测凋亡率,应用免疫荧光染色和Western—blotting检测p—Akt、Bcl—2蛋白表达水平,应用RT-PCR检测Akt、Bcl—2mRNA表达水平,观察KATP开放剂对缺血缺氧PC12细胞凋亡的保护作用。 结果:⑴B,C,D组细胞凋亡率随时间点增加而增加,24小时达高峰。以后随时间延长,逐渐降低。各个时间点B,C,D组细胞凋亡率均高于A组(P<0.01),C组和B,D组比较,细胞凋亡率显著降低(P<0.01),B和D组比较无显著性差异(P>0.05)。⑵B,C,D组各时间点均见P—Akt,Bcl—2表达,均以胞浆表达为主,偶见胞核表达。K ATP通道开放剂组表达最明显。比较PC12细胞各组荧光强度,B,C,D组均显著高于对照组(P<0.01或P<0.05),但C组显著高于B和D组(P<0.01),B组和D组无差别(P>0.05)。⑶B,C,D组随时间延长p—Akt、Bcl—2蛋白表达增加,12小时达高峰。以后逐渐减少。B,C,D组均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。C组表达显著高于B和D组(P<0.01)。B和D组比较无差异(P>0.05)。⑷B,C,D组随时间延长Akt、Bcl—2 mRNA表达增加,12小时达高峰。以后逐渐减少。B,C,D组均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。C组表达显著高于B和D组(P<0.01)。B和D组比较无差异(P>0.05)。 结论:KATP通道开放剂吡那地尔能明显降低缺血缺氧后PC12细胞凋亡,增加P—akt,Bcl—2蛋白及mRNA表达,提示KATP通道开放剂可能通过激活PI3K/Akt/Bcl—2途径来减少缺血缺氧后PC12细胞凋亡。
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