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目的:研究醛固酮(Aldosterone,Ald)诱导人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)自噬的机制,以及自噬在醛固酮诱导血管内皮细胞功能损伤中的作用。方法:以不同浓度的Ald及不同时间对HUVEC进行刺激,用western blot方法检测自噬相关蛋白Microtubule-associated protein 1 light chain 3(MAP1-LC3,LC3)、Beclin-1、Sequestosome-1(SQSTM1/p62)表达量的变化,确定最佳处理时间和最佳处理浓度;并用此浓度及时间观察了Ald对细胞活力的影响[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT法]。然后,分别用Ald受体拮抗剂依普利酮(Eplerenone)、线粒体ATP敏感性钾通道抑制剂(5-hydroxydecanoate,5-HD)、抗氧化剂(Tempol)、自噬抑制剂(3-methyladenine,3-MA)及自噬促进剂(Rapamycin)预处理细胞,用western blot方法检测Ald诱导的自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、SQSTM1/p62表达量的变化。用试剂盒检测各组中Nitric Oxide(NO)含量的变化。用实时定量荧光聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR,Q-PCR)和酶联免疫吸附测定试剂盒(enzyme linked immunosorbent assay kit,Elisa kit)检测各组中内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)、白介素-10(interleukin-10,IL-10)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达量。用免疫共沉淀检测与盐皮质激素受体(mineralocorticoid receptor,MR)可能存在结合的自噬相关蛋白。用免疫荧光共定位验证Beclin-1与MR存在相互作用。检测细胞高表达Beclin-1后对Ald诱导的细胞因子表达量的变化。结果:Western blot结果显示Ald处理血管内皮细胞后,LC3-II/LC3-I、Beclin-1表达量增多,SQSTM1/p62表达量降低,并且具有浓度依赖性和时间依赖性,表明Ald可诱导HUVEC自噬,最佳时间及浓度分别为48小时和100 nM,细胞用此浓度Ald刺激48小时其活力无显著变化;依普利酮和抗氧化剂对Ald诱导的自噬水平起抑制作用;线粒体ATP敏感性钾通道抑制剂5-HD对Ald诱导的细胞自噬没有影响;3-MA和Rapamycin分别对Ald诱导的自噬水平起到抑制和加强作用;Ald降低了内皮细胞中NO表达量;3-MA和Rapamycin对于Ald处理的内皮细胞中NO含量下降没有影响;Ald增强了内皮细胞中IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β表达量,但对ET-1和TNF-α的表达量没有影响;3-MA对Ald诱导的内皮细胞中IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β表达量的增高和ET-1没有影响;但是,Rapamycin显著抑制了Ald诱导的内皮细胞中IL-6、IL-8、IL-10、TGF-β表达量的增高,但对ET-1没有影响;MR与Beclin-1存在相互结合;Beclin-1高表达后,降低Ald诱导的内皮细胞中IL-6、IL-8、TGF-β表达量的增高,对IL-10没有影响。结论:Ald能诱导人脐静脉内皮细胞自噬,其机制可能是Ald通过与盐皮质激素受体受体(MR)结合后诱导细胞内活性氧增加,从而引起内皮细胞自噬的发生。自噬在Ald诱导的内皮细胞功能损伤中与NO含量下降没有关系。但是,激活的自噬可通过Beclin-1与MR结合,降低Ald诱导的炎症因子IL-6、IL-8、TGF-β的增高,从而一定程度地抑制Ald诱导的内皮细胞的炎症反应。