论文部分内容阅读
猪的主要组织相容性复合体又称猪的白细胞抗原(swine leukocyte antigen),它是位于猪的7号染色体上的是一组紧密连锁、高度多态并且与疾病抵抗和经济性状相关联的基因,它编码与免疫应答相关的一类细胞膜糖蛋白的基因簇,通常被分为SLA I, SLA II和SLA III三个类群,其中SLA I和SLA II是最重要的经典分子。在人类器官移植中人源器官缺乏的今天,人们不得不将目光转移到猪身上;猪被认为是人类异种器官移植的理想供体动物,除其解剖组织学、器官形态大小和生理特征等与人相似外,更重要的是SLA和人的HLA具有高度同源性。近20年来,世界各国猪品种的SLA研究中已发现了大量等位基因,国际动物遗传学会(ISAG)建立了SLA等位基因及单倍型的系统命名体系。贵州小型猪源产自贵州省,有着体型小、性成熟早、遗传纯度高抗病力强等特性,是我国重要的宝贵种质资源。由于SLA的研究工作相对于人和鼠的MHC的研究起步较晚,深度不足,我国虽有着宝贵的小型猪物种资源,但在SLA研究领域落后于国外。因此,加快我国小型猪SLA的相关研究,促进与HLA比较分析,对推动免疫应答、动物疫苗、异种移植等领域的发展尤为重要。为确定贵州小型猪封闭群体中SLA经典I类和经典II类基因座位上的等位基因的分布和群体中存在的单倍型,本研究采用反转录、目的基因扩增、克隆、双向测序的方法对22头基础群个体的7个SLA基因座位上的基因进行了cDNA全长序列的克隆分析,并且将所得序列同国内外发现的基因序列进行了同源性进化分析,获得如下研究结果:1.在贵州小型猪封闭群中SLA-1基因座位上共发现了4条新的等位基因,将其命名为:SLA-1*gz01(accession: JQ361648)、SLA-1*gz02(accession: JQ361649)、SLA-1*gz03(accession: JQ361650)、SLA-1*gz04(accession: JQ361651)。经过进化树分析发现SLA-1*gz01、SLA-1*gz04这两个聚在了SLA-1*11等位基因组内;SLA-1*gz02(accession: JQ361649)聚在SLA-1*08等位基因组内,SLA-1*gz03(accession: JQ361650)聚在SLA-1*04等位基因组内。2.在SLA-2基因座位上共发现了5条等位基因,其中中4条为新发现的等位基因。将其命名为:SLA-2*gz01(accession: JQ361652)、SLA-2*gz02(accession:JQ361653)、SLA-2*gz03(accession: JQ361654)、SLA-2*gz04(accession: JQ361655);另一条为已发现的等位基因SLA-B*m(Accession: AF464049.2)。经过进化树分析发现SLA-2*gz01(accession: JQ361652)被聚在了SLA-2*05等位基因组内,SLA-2*gz02(accession: JQ361653)被聚在了SLA-2*w08临时等位基因组内,SLA-2*gz03(accession: JQ361654)被聚在了SLA-2*11组中,SLA-2*gz04(accession:JQ361655)则与SLA-2*02组有着较近的进化关系。3.在SLA-3基因座位上共发现了4条等位基因,其中3条为新发现的等位基因,将其命名为: SLA-3*gz01(accession: JQ361656)、 SLA-3*gz02(accession:JQ361657)、SLA-3*gz03(accession:JQ361658);另一条为已发现的等位基因为SLA-3*0302(Accession: EU432097.1)。分析发现,SLA-3*gz01(accession: JQ361656)与SLA-3*gz03(accession: JQ361658)被聚于了SLA-3*04等位基因组中,SLA-3*gz02(accession: JQ361657)则被归于了SLA-3*05等位基因组中。4.在SLA-DRA基因座位上共发现了2条等位基因,其中1条为新发现的等位基因,将其命名为:SLA-DRA*gz01(accession: JQ361659),另一条为已发现的等位基因为SLA-DRA*010103(Accession: EU432070.1)。分析发现,SLA-DRA*gz01(accession: JQ361659)与SLA-DRA*010101(Accession: BX088590)有着较近的进化关系。5.在SLA-DRB1基因座位上共发现了2条等位基因,在SLA-DQA基因座位上共发现了4条等位基因,在SLA-DQB1基因座位上共发现了4条等位基因,这些序列均为被发现的等位基因。它们分别是:SLA-DRB1*0901(Accession: EU432073.1),SLA-DQA*yn(Accession: AY102475.1), SLA-DQA*0301(Accession: EU722913.1),SLA-DQA*0101(Accession: DQ883218.1), SLA-DQB1*0801(Accession:DQ303219.1),SLA-DQB1*113C3(Accession:AY135574.1),SLA-DQB1*0901(Accession: EU432063.1), SLA-DQB1*0601(Accession: DQ883219.1),另外一个SLA-DRB1等位基因(Accession: AK347078.1)和一个SLA-DQA等位基因(Accession:AK230483.1)未被给予官方命名,我们将其临时命名为SLA-DRB1*gz01和SLA-DQA*gz01。6.在群体中我们共发现了2个SLA I类和2个SLA II类单倍型,其中一个SLAII类单倍型(Hp-00.14)已经存在,另三个单倍型均为新发现的单倍型,将其分别临时命名为:Hp-gz01.00(SLA-1*gz01, SLA-3*gz01, SLA-2*gz01);Hp-gz02.00(SLA-1*gz02, SLA-3*gz01, SLA-2*B*m); Hp-gz00.01(SLA-DRA*gz01,SLA-DRB1*gz01, SLA-DQA*0101, SLA-DQB1*0601)。7.依据贵州小型猪群体中发现的等位基因的序列特征,我们设计了25条序列特异性引物,对5头子代个体进行了PCR-SSP方法的分型。发现子代个体中存在群体中的四种单倍型。