目的:探讨EV快速病原学诊断和基因分型方法;分析VP1序列变异与小儿中枢感染的关系。 方法:通过RT-PCR方法,采用通用引物检测中枢神经系统感染患儿脑脊液中EV RNA;采用分型引物扩增并测序EV的VP1部分序列并对比GENBANK的相关序列进行型别鉴定,同时用NCBI上的BLAST软件,对测序结果进行分析;采用型特异引物扩增检测临床标本中EV71的感染情况。 结果:肠道病毒在无菌性中枢神经系统感染急性期CSF检出率为74.6%,仍为小儿中枢感染的第一位病原体;利用分型引物可以扩增分型其中62.0%阳性标本,随机抽取7条片断进行克隆测序并利用GENBANK分型全部成功,相关序列同源性均在97%以上;本研究测序获得的VP1序列与GENBANK上记载的相关序列相比发生了1%～3%的变异,分析得到的4例定型为COXB3的VP1片断序列,与基因序列最接近的strain Nancy(AF231764)相比,发现在第856氨基酸位点上由谷氨酰胺变异为组氨酸。中枢神经系统感染患儿中2例由EV71引起,手、足、口病患儿中1例由EV71引起。 结论:①采用通用引物,RT-PCR可以快速准确的检测出中枢神经系统感染的肠道病毒,此方法敏感性高、特异性强、省时省力。②采用分型引物扩增并测序,将EV的VP1部分序列与GENBANK中的EV标准毒株进行对比,根据基因序列的同源性进行EV型别鉴定是一种切实可行的方案。③EV的VP1基因856氨基酸位点上由谷氨酰胺(glutanine)变异为组氨酸(histidine)可能是COXB3致病性增强的主要原因,推测此位点氨基酸的变异,可能引起病毒毒力和与宿主细胞受体亲和力的改变,从而导致了中枢神经系统的严重损害,但同一血清型引起的神经组织损害及临床严重程度不同,确切机制尚需进一步研究。④EV71所致的中枢神经系统感染和手、足、口病在青岛和滨州地区散在发生。