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非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）是一种高度复杂的双链DNA病毒,主要在宿主细胞质中复制,在各种环境条件下都能持续存在,很容易传播。ASFV会引起的猪的高度传染性出血病,发病率和死亡率高达100%。自1921年在肯尼亚被发现以来,ASFV逐渐蔓延到了欧洲和亚洲,给世界生猪养殖造成了重大的经济损失,多年来,尽管一直在开展ASFV疫苗的探索,但安全高效ASFV疫苗的研究一直没有取得重大成功。先天免疫是宿主抵御入侵病原体的第一道防线,ASFV采取多种策略来拮抗宿主天然免疫以实现病毒的高效感染和复制。目前MGF505和MGF360多基因家族的若干成员能拮抗I型IFN的产生,但其作用机制尚待阐释。本研究探讨了MGF360-13L对c GAS-STING通路介导I型IFN产生的影响,揭示了ASFV免疫逃逸机制,为宿主与病毒的相互作用提供了新的见解。主要研究结果:1.MGF360-13L抑制Ⅰ型IFN产生及其介导的信号转导为探究ASFV对IFN-I信号通路的抑制作用,MGF505和MGF360多基因家族的多个病毒基因转染HEK 293T细胞,q PCR检测IFN-β的m RNA表达水平;STING或c GAS/STING共转染HEK 293T细胞,双荧光素酶报告系统研究IFN-β启动子活性。结果显示,MGF505-3R、-A528R,MGF360-12L、-13L、-14L、-A276R能够显著抑制由poly（I:C）诱导的IFN-β的表达并均能够显著抑制IFN-β的启动子活性。将MGF360-13L转染3D4/21细胞并用干扰素刺激DNA（ISD）片段或poly（I:C）处理,q PCR检测Ⅰ型IFN信号通路和JAK-STAT信号通路关键分子m RNA转录水平,双荧光素酶报告系统研究IFN-β启动子活性。结果显示,MGF360-13L能显著减弱ISD或poly（I:C）介导的Ⅰ型IFN信号通路（IFN-β、ISG15、ISG54、ISG56、STING、TBK1）关键基因和JAK-STAT信号通路关键基因（JAK1、STAT1、STAT2、STAT3、STAT6、IRF9）m RNA转录水平及IFN-β启动子活性。2.MGF360-13L抑制c GAS-STING介导的IFN-β活化为探究MGF360-13L对c GAS/STING诱导的信号转导效应的影响,MGF360-13L分别与c GAS/STING或STING共转染HEK 293T细胞,双荧光素酶报告系统检测IFN-β、IRF3和NF-κB的启动子活性。结果显示,MGF360-13L异位表达显著抑制IFN-β、IRF3和NF-κB启动子的激活,并且MGF360-13L能逆转2’3’-c GAMP刺激STING诱导的IFN-β、IRF3和NF-κB的激活。为确定MGF360-13L抑制c GAS/STING途径的靶分子,将MGF360-13L分别与STING的下游衔接蛋白质粒共转染HEK 293T细胞,双荧光素酶报告系统检测IFN-β的启动子活性,结果显示,MGF360-13L能同时抑制TBK1、IKKε、p65和IRF3/5D超表达介导的IFN-β的启动子活性。3.MGF360-13L抑制Ⅰ型IFN产生的分子机制为探究MGF360-13L是否会影响STING、TBK1和IRF3之间的相互作用,MGF360-13L转染3D4/21细胞并用ISD处理,免疫共沉淀技术检测STING、TBK1和IRF3之间的相互作用。结果显示,MGF360-13L能抑制STING与TBK1或IRF3的相互作用,但MGF360-13L是否抑制TBK1或IRF3的磷酸化不清楚,将MGF360-13L转染3D4/21细胞,ISD处理后进行Western Blot检测。结果显示,MGF360-13L抑制ISD诱导的3D4/21细胞中TBK1和IRF3的磷酸化。同时,天然凝胶电泳结果显示,在MGF360-13L过表达时,ISD诱导的IRF3二聚化也明显被抑制。此外,将MGF360-13L与c GAS/STING共转染HEK 293T,Western Blot结果显示MGF360-13L能抑制c GAS/STING诱导的TBK1和IRF3磷酸化,并且MGF360-13L不影响细胞质中IRF3和p IRF3的水平,但显著降低了细胞核中p IRF3的表达,间接免疫荧光结果显示,MGF360-13L转染后,IRF3在细胞核周围堆积,并呈现出紧贴核区的特点,表明MGF360-13L能抑制IRF3的核定位。根据以上结果得出如下结论:1.MGF360-13L能拮抗Ⅰ型IFN的产生并抑制其介导的信号转导。2.MGF360-13L抑制c GAS-STING介导的IFN-β活化并拮抗TBK1和IRF3向STING的募集。3.MGF360-13L抑制TBK1、IRF3的磷酸化、二聚化及IRF3的核易位。