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近年来,随着我国集约化养殖业的快速发展,由于不正确的使用药物引起的中毒,饲料发霉,细菌、病毒或寄生虫以及环境因素所引起的畜禽肝脏损害越来越多。动物肝脏的损伤造成了物质代谢障碍、胆汁的形成和排泄障碍、解毒能力降低等一系列病理变化和相应的综合症,极大地影响了动物的生产性能,给畜禽养殖业带来了严重的危害。因此,对动物肝脏疾病的有效治疗和控制,是广大科技工作者亟待解决的问题。
中药是我国传统文化的瑰宝,几千年来为人民群众的治病防病起到了重要的作用,它具有低耐药性,低药物残留,对动物、人类和自然环境不良影响较小,符合当今绿色环保的潮流的优势。现代药理研究证明,中药能够增强机体的免疫机能,传统上用于肝病治疗中的许多中药具有清热解毒、利湿退黄、活血化瘀、疏肝理气等功效,可以改善肝脏血液循环,增加氧利用度,促进肝细胞修复,并能有效缓解临床症状,保护肝脏。本论文通过细胞试验和动物试验对27种具保肝作用的中西药物进行定性研究,通过检测肝损伤指标对有效药物进行评价,旨在得到能够安全有效保护肝脏的药物,为寻找治疗动物肝脏疾病的有效药物提供依据,并为兽医中草药保肝效果的研究提供参考。
首先进行了27种中西药在体外肝细胞的筛选试验。采用Ⅳ型胶原酶灌流法分离鸡肝细胞进行原代培养,用MTT法测定试验组鸡肝细胞的存活情况,根据OD值计算药物对鸡肝细胞的生长抑制率。27种药物以葡萄糖醛酸内酯、促肝细胞生长素、联苯双酯、肝泰乐、自芍的毒性较强,黄芪、茯苓、大黄、白术的毒性较小。用CCl4体外诱导肝细胞损伤模型,检测培养上清液中天门冬氨酸转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平以及细胞形态学观察,初步探讨了各药物对于肝细胞的保护作用。结果表明,柴胡、垂盆草、当归、大黄、北五味子、黄芩、华蟾素、促肝细胞生长素等药物能明显降低ALT水平,与CCl4损伤组相比差异极显著(P<0.01)。对AST也有较明显的降低作用,与正常组相比差异极显著(P<0.01)。白芍、决明子、甘草、茯苓、丹参、黄芪、三七、肝泰乐、联苯双酯、葡萄糖醛酸内酯组对降低AST,ALT也具有一定的作用。根据体外肝损伤保护试验结果,筛选出柴胡、黄芩、垂盆草、北五味子、丹参、益肝灵片、葡萄糖醛酸内酯、甘草、黄芪等药物进行下一步的动物体内试验。
将360只鸡随机分为12组,每组30只,分组情况为:柴胡组(Ⅰ组),黄芩组(Ⅱ组),柴胡+黄芩1:2组(Ⅲ组),北五昧子组(Ⅳ组),垂盆草组(Ⅴ组),五味子+丹参2:1组(Ⅵ组),复方组(Ⅶ组),联苯双酯组(Ⅷ组),葡萄糖醛酸内酯组(Ⅸ组),益肝灵组(Ⅹ组),肝损伤对照组(Ⅺ组),健康对照组(Ⅻ组)。利用CCl4建立鸡的急性肝损伤试验动物模型,检测鸡血清中的AST,ALT,SOD水平以及肝匀浆中MDA和GSH-px含量,同时取肝组织,做HE染色,观察各组肝组织病理形态学变化,判定各药物对鸡肝损伤的临床保护效果。结果表明柴胡+黄芩(1:2)组,五味子+丹参(2:1)组对实验性肝损伤具有较强的保护作用,其它各组也能一定程度的保护肝脏。