人剪切修复基因XPB转染对人肝癌细胞的生物学影响

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目的将人剪切修复基因XPB 稳定转染人肝癌细胞HepG2,观察转染后细胞内野生型p53、p21WAF1/CIP1、c-myc 等基因的表达变化以及对细胞生长的影响。探讨XPB 基因与p53、p21WAF1/CIP1、c-myc 的相互作用,以及细胞凋亡机制。方法用脂染法稳定转染HepG2,用含G418 800μg/L 选择性培养基筛选单克隆稳定转染重组质粒的HepG2 细胞(HepG2-XPB)和稳定转染空载质粒的HepG2 细胞(HepG2-pcDNA3.1),并用与HepG2-XPB、HepG2-pcDNA3.1 具有相同遗传背景和代数的HepG2 细胞作为空白对照。用RT-PCR 法检测鉴定筛选的细胞克隆中XPB mRNA 表达,用RT-PCR、Western blot 法检测转染XPB 基因后细胞内抑癌基因p53、p21WAF1/CIP1和癌基因c-myc 的表达量变化,并检测细胞的增殖和凋亡。结果1、RT-PCR 检测HepG2-XPB 、HepG2-pcDNA3.1 和HepG2 细胞中XPB mRNA 相对表达量分别为:0.917±0.095、0.552±0.090、0.544±0.098;HepG2-XPB 细胞与HepG2-pcDNA3.1 和HepG2 两对照组相比,XPB mRNA 表达明显增高(P<0.001),说明成功筛选出稳定表达XPB 基因的HepG2-XPB 细胞株。2、RT-PCR 检测三组细胞中p21WAF1/CIP1 mRNA 相对表达量为:0.604±0.073、0.431±0.042、0.424±0.047;HepG2-XPB 细胞中p21WAF1/CIP1 mRNA 相对表达量与HepG2-pcDNA3.1、HepG2 两对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。三组细胞中c-myc mRNA 相对表达量为:0.316±0.039、0.597±0.073、0.583±0.091;HepG2-XPB 细胞与两对组照相比,c-myc mRNA 相对表达量明显降低(P<0.001)。3、Western blot 检测中野生型p53 蛋白在三组细胞中的相对表达量分别为:0.968±0.049、0.673±0.088 、0.675±0.108;p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量分别为:0.905±0.074、0.614±0.037 、0.601±0.059;0.905±0.074;HepG2-XPB细胞中p53和p21WAF1/CIP1蛋白相对表达量均比两对照组高,差异有统计学意义(P<0.001)。三组细胞中c-myc 蛋白相对表达量为0.572
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