昆虫遇到不利自身发育条件时会表现出发育停滞的现象,研究称这种现象为滞育(diapause)。昆虫在各个时期均可以发生滞育,但是对某一种昆虫而言,发生滞育的时期通常是固定的。滞育状态下的昆虫表现出新陈代谢速率的大幅度降低及对外界环境抗性的显著提高,这两种变化导致了昆虫寿命的延长。人为的将滞育分为六个阶段。松毛虫赤眼蜂是一种重要的卵寄生蜂,对多种重要的鳞翅目害虫有较好的防控效果。而且在松毛虫赤眼蜂的工厂化生产中已经运用了滞育技术,但是对其滞育机制的研究却尚未见报道。本研究选取5个不同的发育阶段(滞育预蛹期;正在诱导解除滞育的预蛹期;经过滞育的蛹期;正常发育的预蛹期;正常发育的蛹期),利用荧光定量,蛋白印迹等手段,分析热激蛋白70(HSP70)基因和一氧化氮合酶(NOS)基因的序列的特征并对其在不同发育阶段的表达量进行分析。研究结果如下:1.运用RACE技术克隆了HSP70的全长序列(Genbank登录号为MN709377),长度为2,666 bp,其中,编码区长度为1,992 bp,5’非编码区(UTR)与3’非编码区(UTR)长度分别为49 bp和625 bp。HSP70基因编码区编码663个氨基酸残基,含有其特有的3个保守区域,分子量大小为73 kDa,序列的理论等电点(pI)为5.5,是一个不含信号肽、无跨膜结构的亲水性蛋白。通过系统发育分析松毛虫赤眼蜂的HSP70与同属的螟黄赤眼蜂、短管赤眼蜂的HSP70序列相似性最高。HSP70在松毛虫赤眼蜂滞育期的表达量明显高于其他发育时期。2.克隆了NOS部分序列(Genebank登录号为MN650600),长度为1,014 bp,该序列共编码337个氨基酸残基,是一个无信号肽及跨膜结构的亲水蛋白。通过定量分析发现,NOS在解除滞育的蛹期松毛虫赤眼蜂个体中表达量最高。制备了NOS特异性抗体,经Western blot检测得知,NOS在蛋白水平上的表达趋势与转录水平相同。综上所述,通过本研究结果可以推测HSP70和NOS分别在松毛虫赤眼蜂滞育维持及滞育解除过程中起到一定的作用,为松毛虫赤眼蜂滞育分子机制的研究提供了基础性的数据。