探讨维药溃结安对大鼠溃疡性结肠炎中c-jun的作用及RNA干扰技术

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目的:探讨c-jun基因在大鼠溃疡性结肠炎(UC)中的表达变化及应用RNA干扰(RNAi)技术初步寻找维药西帕依溃结安治疗UC的可能作用靶点。方法:1.采用DNCB(2,4-二硝基氯苯)复合乙酸灌肠的方法复制大鼠溃疡性结肠炎模型,将动物随机分为正常组、溃疡性结肠炎模型组、维药西帕依溃结安干预组、5-氨基水杨酸(5-ASA)阳性对照组和生理盐水阴性对照组,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测各组大鼠结肠组织中c-jun的表达变化;2.构建pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干扰载体,将二者共转染COS-7细胞,倒置荧光显微镜下观察结果,同时用Western blot方法检测GFP蛋白表达。结果:1.在mRNA水平:各组间c-jun的表达无统计学意义(P=0.071)。在蛋白质水平:模型组中c-Jun的表达高于正常组,差异有统计学差异(P<0.05),溃结安干预组中c-Jun的表达低于模型组,差异有统计学差异(P<0.05),溃结安干预组与生理盐水组之间c-Jun的表达有统计学差异(P<0.05);2.成功构建了pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO/c-jun及pSilencer-c-Jun干扰载体,在倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白,且找到了有效的siRNA,经Western blot方法检测GFP蛋白的表达明显降低。结论:1.c-jun基因可能参与了溃疡性结肠炎的发生发展,且c-jun基因可能是维药西帕依溃结安的作用靶点之一。2.成功构建大鼠c-jun基因真核表达质粒及pSilencer-c-Jun干扰载体,并找到了有效地siRNA,为应用RNAi技术研究相关基因和蛋白质提供了实验平台。
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