一株产鬼臼毒素内生真菌发酵条件的研究

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鬼臼毒素是一种具有抗肿瘤和杀虫活性的木脂素类化合物,不仅是治疗尖锐湿疣的良好药物,亦是合成多种治疗癌症药物的前体物质,具有很大的药用价值,因而,人们对鬼臼毒素的需求量日益增加。但是目前多数报道都是有关从植物中分离筛选产生鬼臼毒素菌株的研究,而利用微生物发酵生产鬼臼毒素的报道甚少,因此如何利用微生物发酵扩大生产鬼臼毒素、如何对发酵物中的鬼臼毒素进行定量测定成为人们研究的热点。 目的:研究Ty菌株发酵生产鬼臼毒素的最佳发酵条件;建立对发酵过程中鬼臼毒素定量测定的方法。方法:根据微生物发酵的特点,借鉴采用薄层扫描测定药用植物中活性物质含量的方法,确定对发酵物中鬼臼毒素含量的检测方法;根据PDA培养基配方的成分设计适于Ty菌株发酵的合成培养基,并通过pH、接种量、装液量和发酵时间的筛选对Ty利用此合成培养基发酵的条件进行优化;采用常用真菌鉴定方法对Ty进行鉴定。结果:通过精密度、稳定性试验,并测定加样回收率确定采用薄层扫描法定量测定发酵物中鬼臼毒素含量;合成培养基的最佳配方为:3%淀粉、1.5%蔗糖、1.5%葡萄糖、0.05%蛋白胨、0.05%酵母膏、0.075%K2HPO4和0.075%NaCl,优化后的发酵条件为:初始pH值为6.5,接种量为2.5%的孢子悬液,最适装液量为80mL/250mL锥形瓶,培养时间为7天;通过高效液相色谱(HPLC)和氢核磁共振谱分析,确定培养基的改变并没有对产物性质和成分产生影响。经初步鉴定Ty属于半知菌亚门,丛梗孢目,暗梗孢科,交链孢霉属(Alternaria Nees ex Wall.)。结论:建立薄层扫描法进行发酵物中鬼臼毒素含量的测定,该方法具有相对的可靠性、准确性和简便性;采用设计的合成培养基进行Ty菌株的发酵生产是可行的,通过发酵条件的优化,使得Ty不仅在生物量上,而且在其发酵产物量上都有了较大的提高,为鬼臼毒素的工业化生产奠定了一定的基础。
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