【摘 要】
:
家蚕杆状病毒表达系统在具有复杂的翻译后修饰的蛋白质表达以及疫苗和杀虫剂生产等方面具有很多重要的应用。但家蚕杆状病毒表达系统高效表达外源蛋白的机制并不清楚,而且杆状
论文部分内容阅读
家蚕杆状病毒表达系统在具有复杂的翻译后修饰的蛋白质表达以及疫苗和杀虫剂生产等方面具有很多重要的应用。但家蚕杆状病毒表达系统高效表达外源蛋白的机制并不清楚,而且杆状病毒感染过程中的自身DNA复制和基因表达调控机理也未阐明,参与基因表达调控的许多蛋白因子的功能也未可知。为此,本研究选择家蚕杆状病毒的一个未知功能基因Bm122,对该基因进行功能研究。 对杆状病毒基因组进行基因敲除被公认为是研究病毒基因功能精确且有效的手段,尤其是在研究目的基因在整个感染周期中对病毒DNA复制和基因表达的调控作用方面。本文采用Red重组技术敲除Bm122基因来研究该基因的功能。家蚕杆状病毒基因Bm122位于家蚕核型多角体病毒基因组116323nt-116928nt,编码框总长为606bp,编码的氨基酸数为201个,编码的蛋白大小为23 kD左右,Bm122编码的蛋白主要存在于细胞核内。鳞翅目NPV和GV中都有Bm122的同源基因,其同源基因Ac146是AcMNPV必需基因。有人推测Bm122的缺失可能会影响BmNPV的复制或者晚期基因的表达。 为研究Bm122的功能,运用Red重组技术构建了Bm122-ko-bacmid,实现对Bm122基因的敲除;为消除Bm122基因的敲除对其上下游基因正常功能的影响,PCR扩增出Bm122基因的完整开放阅读框,利用Bac-to-Bac系统构建了Bm122-re-bacmid,实现对Bm122基因的异位补回。Bm122-ko-bacmid、Bm122-re-bacmid、wtbacmid(野生型)分别转染BmN细胞,在转染后的不同特定时相收集细胞培养液上清,TCID50(50% tissue culture infectivedose)终点稀释法测定三种病毒的滴度,发现Bm122缺失后病毒的滴度在各时相均为零,表明Bm122缺失后细胞内可能无法产生正常水平的BV(budded virus);为深入研究Bm122基因缺失如何影响病毒正常增殖,将三种bacmid转染家蚕细胞后透射电镜观察,结果表明Bm122敲除后细胞内只见少许类似多角体结构,进一步证实Bm122的缺失降低了BV的生成水平,并且影响BV的正常形态。三种bacmid转染细胞后,收集不同时间点的细胞,提取总DNA,DpnⅠ消化外源bacmid后,进行荧光定量PCR,比较三种病毒的复制水平。同时使用纯化的wtbacmid按一定的稀释倍数稀释后,进行荧光定量,获得病毒DNA复制的拷贝数指数与荧光定量所得的Ct值之间的线性关系,将上述荧光定量PCR所获得的Ct值换算成基因的拷贝数,然后对三种病毒复制水平进行比较。结果表明Bm122敲除后,病毒的复制水平明显降低,可能是由于Bm122-ko-bacmid型病毒不能发动第二次感染引起的。将Bm122-ko-bacmid和wtbacmid分别转染家蚕BmN细胞后,收集细胞进行western blot实验,使用LEF-3单克隆抗体孵育后显色,结果表明Bm122的缺失不影响lef-3正常表达。
其他文献
摘要:一堂出彩的信息技术课要注重培养学生的探索性学习,让学生亲自参与地、丰富生动地去思考,要让学生经历实践和创新。这就要求我们在以后的信息技术课堂教学过程中,注意调动学生的积极性,多给学生留些探索的天地,让课堂更加多彩。 关键词:教师;课堂设计;多媒体 中图分类号:G632.0 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)09-0105 教学是一门艺术,让课堂教学“出彩”,这是许
摘要:多媒体技术在历史教学实践中的应用有利有弊,如何合理、高效地运用之,值得我们每一位教师深思。在本文中,笔者主要谈了多媒体技术在初中历史教学中应注意的问题。 关键词:多媒体技术;初中历史教学;注意的问题 中图分类号:G633.51 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)09-0102 运用现代化的教育手段是教育现代化的重要体现。多媒体技术的应用和发展使初中历史课堂给人以耳
红系分化是生物体内复杂又精细的重要调控过程之一,涉及机体的发育,干细胞分化与体细胞起源,细胞癌变的调控失序等。红系分化的过程由众多的转录因子,小分子物质如piRNA和microRN
摘要:当今世界,“网络”已成为人们了解、走向世界的一扇快捷的窗户,很多学生也对网络一“网”情深。网络是把双刃剑,有利有弊;我们要善于发挥网络的积极作用,避免网络的消极作用。课题组通过课题的开展研究,有效应对一“网”情深;通过开展网络安全主题班会,让黑板报说话,网络安全知识竞赛,网络安全演讲比赛等系列活动让学生更好地了解网络安全,提高网络安全意識和能力,安全、健康、文明上网! 关键词:网络;有效;
CycD2是一种植物细胞周期相关蛋白基因,Cockcroft(2000)等将CycD2基因转入烟草中发现,转基因烟草中CycD2表达量的增加导致细胞分裂速率加快,同时转基因植株地上部的生长速率也比
LEA蛋白是当前植物胚胎学以及逆境生理学研究的热点之一,胚胎晚期丰富蛋白(LEA蛋白)是一个大的基因家族,其表达产物LEA蛋白随着种子脱水而合成的植物蛋白,其中一些蛋白能够被干旱、高盐、寒冷以及ABA等胁迫诱导。根据不同物种LEA蛋白的区域同源性将LEA分为六族。脱水素(dehydrin)属于第二族LEA蛋白,能够在植物胚胎发育后期以及逆境下大量表达,广泛存在于植物界。它是具有高度热稳定性的亲水性
徐加存1977年出生于山东莱芜。2000年毕业于山东师范大学美术学院。2000年至2005年自愿赴西藏工作,任教于西藏拉萨高等师范专科学校。2008年毕业于首都师范大学美术学院,获硕
摘要:小学数学学科是一门抽象性、概括性很强的学科,而小学生的年龄特点是容易接受直观形象的事物,合理恰当地运用多媒体辅助教学,不仅可以简化教学过程,更能通过直观性和个别化,发挥学生的主体作用,进一步调动学生的学习积极性,使学生乐意并有更多的精力投入到现实的、探索性的数学活动中。在教学中,运用多媒体技术进行教学,那生动的画面、直观动态的演示效果,可以把学生带进一个五彩缤纷的境界,创造出生动而有趣的学习
摘要:数形结合思想在物理解题中的应用能够帮助我们较清晰地分析物理题目,较快地解题。本文對高中物理解题中如何运用数形结合思想进行了探究。文章首先概述了数形结合思想以及高中物理特点;其次分析了如何通过“数”来解决“形”的问题;再次分析了如何让“形”来帮助我们了解“数”;最后对数形结合思想进行了思考。 关键词:数形结合思想;物理题目;应用技巧 中图分类号:G633.7 文献标识码:A 文章编号:19