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目的:口腔鳞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤,在口腔癌中约占90%,且近几十年来患者的5年生存率一直停留在50%左右。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是肿瘤组织中一类可以自我复制、多谱系分化和再生同源性肿瘤的瘤细胞,被称为“癌症根源”。众所周知,CSCs除了具有传统干细胞分裂增殖的能力,生成肿瘤组织外,同时在肿瘤的侵袭、转移、复发及耐药等方面也起着重要作用。肿瘤微环境对于肿瘤细胞尤其是肿瘤干细胞的调控,在肿瘤的发生发展及治疗中起着重要作用。因此了解肿瘤微环境对肿瘤细胞及肿瘤干细胞的调控方式及具体机制,对于提高肿瘤患者的生存率以及改善预后具有重要意义。本研究主要探讨肿瘤微环境中的白细胞介素-17(Interleukin-17,IL-17)对于口腔鳞癌细胞干性及生物学行为的影响,同时研究在该过程中发生的上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)是否是IL-17调控口腔鳞癌的主要机制,以期望为OSCC患者的治疗提供新的思路和策略,从而提高患者的治疗疗效及生活质量。方法:1.细胞分类:以口腔鳞癌细胞的干性标记CD133的表达情况对口腔鳞癌SCC9细胞进行分类,表达CD133的肿瘤细胞为肿瘤干细胞样细胞(Cancer Stem-like Cells,CSLCs),即CD133+SCC9,不表达CD133的肿瘤细胞为肿瘤非干细胞样细胞(Non-CSLCs),即CD133-SCC9。2.IL-17浓度筛选:鉴于肿瘤实体组织内Non-CSLCs数量大于95%,因此对CD133-SCC9细胞进行的不同浓度IL-17处理,浓度梯度分别设为25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml,通过CCK8增殖实验测量处理0h、24h、48h、72h后各组细胞的增殖能力,选择促CD133-SCC9细胞增殖能力最强时所对应的IL-17浓度为最佳实验浓度,为口腔鳞癌细胞构建稳定表达IL-17的肿瘤微环境。3.细胞分组:将CD133+SCC9、CD133-SCC9两种细胞分别设置实验组与对照组,实验组进行等量的最佳浓度IL-17处理相同的时间(133+/17+、133-/17+),对照组加入等量细胞培养基(133+/17-、133-/17-)。4.干性检测:用免疫荧光实验及Western-blot技术检测处理前后CD133+SCC9、CD133-SCC9细胞的干细胞标记蛋白CD133表达情况。5.迁移及侵袭能力检测:分别用划痕实验、transwell侵袭实验检测处理前后两种细胞的迁移能力和侵袭能力。6.EMT相关标记物检测:用Western-blot技术检测处理前后两种细胞的E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白质表达水平的变化情况。结果:1.CCK8实验结果提示:一定浓度IL-17(25ng/ml、50ng/ml、75ng/ml、100ng/ml、150ng/ml)能够促进CD133-SCC9增殖,且在75ng/ml时促增殖能力最明显,当浓度过高时(200ng/ml)则会抑制细胞的增殖(P均<0.05)。2.免疫荧光实验结果显示:同等条件下,CD133+SCC9细胞中CD133阳性细胞数及其表达强度明显高于CD133-SCC9细胞,且两组SCC9细胞在IL-17干预后CD133表达增加,该增加趋势在CD133+SCC9细胞中表现更为明显(P<0.05)。3.Western-blot实验结果表明:相同条件下,CD133蛋白表达量在CSLCs中明显多于Non-CSLCs,与对照组相比,实验组CD133+SCC9、CD133-SCC9细胞干细胞标记蛋白CD133表达增加,且CD133+SCC9的增加趋势更为突出(P<0.05)。4.划痕实验结果提示:相同条件下CD133+SCC9细胞较CD133-SCC9细胞迁移距离多,与各自的对照组相比,实验组CD133+SCC9、CD133-SCC9细胞在24h及48h的迁移距离均较多,迁移能力均增强,且该增强趋势在CD133+SCC9细胞中表现更为明显(P<0.05)。5.Transwell实验结果提示:相同条件下CD133+SCC9细胞较CD133-SCC9在48h后穿透基质胶的细胞数量更多,与各自的对照组相比,实验组CD133+SCC9、CD133-SCC9细胞在48h后穿透基质胶的细胞数量较多,侵袭性增强,且在CD133+SCC9细胞中增强趋势表现更突出(P<0.05)。6.Western Blot检测EMT相关标记物结果提示,相同条件下CD133+SCC9细胞较CD133-SCC9上皮性标记蛋白表达低,间质性标记蛋白高,与各自的对照组相比,实验组CD133+SCC9、CD133-SCC9细胞的E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin和Vimentin蛋白表达均增加,且三种蛋白的变化趋势在CD133+SCC9细胞中表现更明显(P<0.05)。结论:IL-17作用下口腔鳞癌CD133-SCC9、CD133+SCC9细胞均发生了EMT,引起两种细胞的干性、迁移能力、侵袭能力有所增强,且这种增强趋势在CD133+SCC9细胞中表现更为突出,说明IL-17可能通过EMT来调节口腔鳞癌细胞的干性,进而影响其体外生物学行为。