【摘 要】
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目的从改善胰岛β细胞功能减退的角度出发,探讨PI3K、PDX-1表达水平及PDX-1 DNA甲基化程度在“调理脾胃针法”调节2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能当中的作用,以验证PI3K/PDX-1信号通路的针刺效应。方法将雄性SD大鼠（45只）随机分成空白组（15只）与造模组（30只）,分别以标准饲料和高糖高脂饲料喂养。8周后,造模组以腹腔注射STZ（streptozotocin,链脲佐菌素）构建2型糖
【基金项目】
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天津市中医药管理局项目《从PI3K/PDX1影响甲基化途径探讨针刺对胰β细胞增值机制》；
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目的从改善胰岛β细胞功能减退的角度出发,探讨PI3K、PDX-1表达水平及PDX-1 DNA甲基化程度在“调理脾胃针法”调节2型糖尿病大鼠胰岛β细胞功能当中的作用,以验证PI3K/PDX-1信号通路的针刺效应。方法将雄性SD大鼠（45只）随机分成空白组（15只）与造模组（30只）,分别以标准饲料和高糖高脂饲料喂养。8周后,造模组以腹腔注射STZ（streptozotocin,链脲佐菌素）构建2型糖尿病大鼠模型,并将成模大鼠随机分为模型组与针刺组。随后干预期间,各组大鼠均以标准饲料喂养。针刺组予调理脾胃针法干预,模型组仅进行抓取、穿针刺服,空白组不做处理,共干预4周。每周记录各组大鼠的体重、FBG（fasting blood-glucose,空腹血糖）及OGTT2h PG（Glucose tolerance 2 hours postprandial blood glucose,口服葡萄糖2小时后血糖）。第4周干预结束后进行处死,获取大鼠胰腺组织。利用免疫组织化学染色法观察大鼠胰岛β细胞的胰岛素分泌情况;TUNEL染色法观察大鼠胰岛的细胞凋亡情况;RT-qPCR、Western blot技术检测各组大鼠胰腺中PI3K（Phosphatidylinositol 3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶）、PDX-1（Pancreatic and duodenal homeobox-1,胰腺十二指肠同源盒-1）mRNA及蛋白的表达水平;焦磷酸测序法检测胰腺中PDX-1 DNA甲基化程度。通过以上检测结果,以期探究调理脾胃针法针刺降血糖效应的潜在作用机制。结果1外观行为学情况:调理脾胃针法干预前,空白组大鼠饮食水、尿量、毛色、大便便质等外观行为学情况良好,体重明显大于模型组及针刺组（P＜0.05）。干预后,空白组及模型组外观行为学情况如前,针刺组较前有所改善;空白组体重持续增加（P＜0.05）,针刺组及模型组体重持续减少（P＜0.05）,但针刺组体重减少的趋势较模型组平缓。2血糖检测:调理脾胃针法干预前,模型组与针刺组大鼠FBG（P＞0.05）、OGTT2h PG（P＞0.05）无统计学差异,两组血糖均明显高于空白组（P＜0.05）。干预开始后,针刺组FBG、OGTT2h PG呈现缓慢下降趋势,干预4周后,明显低于模型组（P＞0.05）,并趋近于空白组;模型组FBG、OGTT2h PG呈现缓慢上升的趋势,干预4周后较前明显增加（P＜0.05）,且高于针刺组（P＜0.05）;空白组干预前后FBG、OGTT2h PG无明显变化（P＞0.05）。3胰岛素分泌检测:调理脾胃针法干预4周后,免疫组织化学染色结果显示三组大鼠胰岛素表达量存在统计学差异（P＜0.05）,与空白组大鼠相比,模型组大鼠胰岛素表达量明显减少（P＜0.05）;针刺组胰岛素表达量虽低于空白组,但差值不存在统计学差异（P＞0.05）,与模型组相比明显增加（P＜0.05）。4细胞凋亡检测:调理脾胃针法干预4周后,TUNEL染色结果显示模型组胰岛细胞凋亡程度远高于空白组,差值存在统计学差异（P＜0.05）;与模型组相比,针刺组的胰岛凋亡细胞数量有所减少,且存在统计学差异（P＜0.05）。5调理脾胃针法调节胰岛β细胞功能减退的机制。（1）RT-qPCR结果显示,调理脾胃针法干预后针刺组大鼠PI3K、PDX-1 mRNA的表达水平均高于模型组（P＜0.05）,但稍低于空白组的表达水平（P＞0.05）。（2）WB结果显示,调理脾胃针法干预后针刺组大鼠PI3K、PDX-1的蛋白表达水平均高于模型组（P＜0.05）,但低于空白组的表达水平（P＜0.05）。（3）焦磷酸测序结果显示,调理脾胃针法干预后针刺组PDX-1甲基化程度较模型组降低（P＜0.05）,而空白组大鼠PDX-1甲基化程度明显低于针刺组和模型组（P＜0.05）。结论1调理脾胃针法可降低T2DM大鼠FBG、OGTT2h PG,改善其外观行为学情况。2调理脾胃针法可增加胰岛素分泌而改善胰岛β细胞功能,减轻胰岛细胞凋亡程度。3调理脾胃针法可提高T2DM大鼠胰岛细胞中PI3K、PDX-1的表达,降低PDX-1DNA甲基化程度,其改善胰岛β细胞功能的机制可能与此相关。
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