【摘 要】
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为了研究黑暗链霉菌安普霉素生物合成基因,首先通过鸟枪克隆的方法克隆其安普霉素抗性基因.提取黑暗链霉菌H6总DNA,经Sau3AI不完全酶切、凝胶电泳,收集6～15kb片段连接到载体pU
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为了研究黑暗链霉菌安普霉素生物合成基因,首先通过鸟枪克隆的方法克隆其安普霉素抗性基因.提取黑暗链霉菌H6总DNA,经Sau3AI不完全酶切、凝胶电泳,收集6～15kb片段连接到载体pU702.连接液转化标准宿主菌S.lividans TK24原生质体,最终得到6个可以在安普霉素平板上生长的阳性克隆.阳性克隆中重组质粒pSYX1含有12kb黑暗链霉菌的DNA,对12kb片段进一步分析将安普霉素抗性基因定位在1.5kb SphI-KpnI片段上.抗性基因上游2.0kb BamHI-SphI片段测序表明在该片段中有一个ORF,位于877～1995bp之间,编码373个氨基酸.在这个ORF中,碱基组成为109A+388C+489G+136T,G+C含量为78.2﹪,密码子第三位碱基是G+C的占96.3﹪,符合链霉菌基因的特点.同源比较分析没有发现同源序列,推测这一序列可能是一未知的新基因,命名为aprA.基因重组菌株不能合成安普霉素,证明克隆到的aprA基因参与黑暗链霉菌安普霉素的合成,同时也证明在黑暗链霉菌中安普霉素生物合成基因与安普霉素抗性基因是连锁存在的.
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