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1.研究背景人14型腺病毒(Ad14)及55型腺病毒(Ad55)均属B种腺病毒,近年来常有爆发,可致重症呼吸道疾病甚至死亡。Ad14与Ad55具有高度同源的Penton base和Fiber蛋白,但Hexon蛋白高变区(Hyper-Viable-Region,HVR)差异较大。前期结果显示,我国人群Ad14、Ad55群体免疫水平较低,普遍面临其威胁。目前尚无抗Ad14及Ad55的特效药物或预防疫苗,分析Ad14、Ad55的主要中和表位有利于治疗性抗体及预防性疫苗的研发。利用改换表面蛋白或部分片段的嵌合病毒可定位中和抗体的优势表位。2.研究目的制备携带Ad55单个HVR的嵌合Ad14报告病毒,分析人中和血清识别的主要中和表位,研究自然感染与疫苗免疫诱导的抗体的表位识别特性,为单克隆中和抗体及疫苗研发提供参考。3.研究方法基于实验室前期构建的E3基因敲除的Ad14,通过同源重组技术将其Hexon高变区HVR1至HVR7分别替换为Ad55的相应HVR,得到携带Ad55 HVR的嵌合Ad14报告病毒;检测Ad14阳性血清、Ad55阳性血清对这些嵌合病毒的中和活性,分析人中和抗体的优势表位;利用Western-blot技术及Fiber蛋白吸附技术研究Fiber特异性抗体的中和活性;利用Westerin-blot技术分析Penton特异性抗体的产生情况;以灭活Ad14、Ad55免疫小鼠制备小鼠中和血清,研究小鼠抗体的表位识别谱;以Fiber蛋白免疫小鼠,探索Fiber蛋白诱导交叉中和抗体的能力。4.研究结果成功制备7种携带Ad55单个HVR及1种携带全部Ad55 HVR的嵌合Ad14报告病毒,发现人源Hexon特异性中和抗体主要识别HVR2,5,7。Fiber特异性中和抗体仅存在于Ad14,Ad55双阳性血清,且对Ad14、Ad55均具有中和活性。双阳性血清、Ad14单阳性血清、Ad55单阳性血清均含有Penton结合抗体,但不具备中和活性。小鼠免疫血清主要识别Ad14的HVR1、2、7,Ad55的HVR1、2,以及Fiber。在小鼠中,多次免疫Ad14或Ad55的Fiber蛋白可诱导显著的交叉中和抗体反应,而且Ad55 Fiber蛋白具有较强的免疫源性。5.结论阐明自然感染和疫苗免疫诱导的Ad14、Ad55中和抗体的表位识别特性,发现Fiber是交叉中和抗体的主要靶标,且以其免疫小鼠可诱导交叉中和抗体反应。这些发现为研究Ad14和Ad55的免疫学特性提供新的线索,也为单克隆中和抗体研发及疫苗设计奠定基础。