m<,2>AchR-Gilα融合蛋白的表达及机能的研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:az4112513
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研究人员采用分子生物学技术,利用Baculovirus-insect-cell(Sf9cells)系统构建和表达m<,2>AchR-Gilα融合蛋白(m<,2>AchR-Gilα),检测在配体的作用下m<,2>AchR-Gilα的功能及信号转导时分子间相互作用的机制和影响因素.结论:采用GPCR-G蛋白融合蛋白技术,研究人员通过Baculovirus-insect-cell系统表达了m<,2>AchR蛋白和m<,2>AchR-Gilα融合蛋白,并用实验证明两者都具有m受体配体结合特性和后者的m<,2>AchR-Gilα与Gilα间偶联功能.m<,2>AchR-Gilα对GDP的亲和性决定于m<,2>受体配体的性质,完全激动剂使亲和性降低,部分激动剂次之,拮抗剂由增高.通过配体引起的GDP亲和性的变化可以判定配体的性质,有利于筛选和鉴别m<,2>AchR-Gilα亚型特异性药物.在同样条件下m<,2>AchR-Gilα对GDP的亲和性亦下降,但降低幅度小于GDP.ATP对[<35>S]GTPγS与m<,2>AchR-Gilα结合需要Mg<2+>离子的参与.激动剂、m<,2>受体、Gilα和Mg<2+>构成的复合体是GTP-GDP交换反应过渡状态.
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