AM对卵巢癌CAOV3细胞体外血管生成拟态的效应研究

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目的:在卵巢癌所有类型中,上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)最常见,EOC中的CAOV3细胞系最初从54岁白种女性卵巢癌中分离培养而来,该细胞系具有较好的稳定性,广泛用于卵巢癌的体外研究。肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)本质是种肽类物质,具有多种功能,最初是从嗜铬细胞瘤中发现,目前已被证实与肿瘤的发生发展密切相关,肾上腺髓质素抑制剂(AM22-52)可以通过阻断AM与其受体的特异性结合,从而发挥相应的作用。本次研究则以CAOV3系作为研究对象,通过体外试验来探查AM、AM22-52对于此癌细胞体外血管生成拟态的影响。方法:试验分正常对照组、AM暴露组、AM22-52暴露组和AM与AM22-52共孵育组四组。利用cck-8试验检测CAOV3细胞暴露在不同浓度的AM和AM22-52中不同时间点后,于450nm处测定光吸收值(OD)值,检测AM、AM22-52对CAOV3细胞生长率的作用,确定AM和AM22-52的作用浓度和作用时间;利用Matrigel凝胶进行三维立体培养实验,显微镜下观察CAOV3细胞在AM和AM22-52药物干预下的体外成管效应;利用划痕实验,显微镜下观察AM和AM22-52药物干预对CAOV3细胞迁移速率的影响。结果:1.1×10-9,1×10-8,1×10-7和1×10-6μmol/L四个浓度的AM和AM22-52分别孵育CAOV3细胞24h,48h和72h后,经cck-8试剂盒的检测,结果显示:与正常对照组相比,AM明显促进CAOV3细胞的增殖,有统计学差异,随着AM的作用浓度与时间的增加,增殖效率也增加,呈现出时间和浓度依赖性;AM22-52对CAOV3细胞增殖的效应并不明显,与正常对照组相比,差异不具有统计学意义;与AM组相比,AM与AM22-52共同孵育组可明显抑制有AM诱导的CAOV3细胞的增殖,有统计学差异,且随药物的作用浓度和时间的增加而增加,也呈浓度和时间依赖性;2、1×10-6μmol/L的AM和AM22-52孵育CAOV3细胞后,Matrigel体外三维培养实验结果提示:与正常对照组相比,AM可明显刺激CAOV3细胞形成小管,小管形成的节点数量、小管间连接点数和小管形成的总长度,与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);而AM22-52孵育后无明显刺激CAOV3细胞成管能力,结果与正常对照组相似,无统计学差异;共孵育组可明显抑制CAOV3细胞形成小管,小管形成的节点数量、小管间连接点数和小管形成的总长度,与AM暴露组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),该结果说明AM对于卵巢癌CAOV3细胞体外血管生成拟态具有明显的促进作用,而AM22-52可明显抑制AM的促小管生成作用;3.1×10-6μmol/L的AM和AM22-52孵育CAOV3细胞48h后,细胞划痕实验结果表明:与正常对照组相比,AM孵育之后,CAOV3细胞的迁移能力明显提高,而AM22-52组的迁移活力与正常对照组相比差异较小;与AM组相比,共孵育组CAOV3细胞迁移能力明显减弱,说明AM可明显增强CAOV3细胞的侵袭作用,AM22-52可明显抑制CAOV3细胞的侵袭作用。结论:1.AM明显促进CAOV3细胞增殖,AM22-52可抑制有AM诱导的CAOV3细胞增殖效应;2.AM对CAOV3细胞体外血管生成拟态具有明显的促进作用,AM22-52可明显抑制AM的促体外血管生成拟态效应;3.AM可以明显提高CAOV3细胞的细胞迁移能力,AM22-52可以明显抑制AM的促细胞迁移能力。以上结果揭示AM具有明显的刺激CAOV3细胞体外血管生成拟态的作用,同时还可影响其生长和迁移能力。抑制AM,或可作为一种潜在治疗上皮性卵巢癌的新思路、新方法。
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