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目的: 通过单克隆杂交瘤技术,筛选出稳定表达的EPF单克隆抗体杂交瘤细胞株,制备EPF单克隆抗体,研究抗EPF单抗对黑色素瘤细胞A-375增殖、凋亡的影响,构建A-375黑色素裸鼠移植瘤模型,观察抗EPF单抗对黑色素瘤A-375裸鼠移植瘤的生长抑制作用. 方法: 1.以本实验室前期原核表达的EPF为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选出可稳定表达EPF抗体的杂交瘤细胞株,BALB/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株制备EPF单克隆抗体,所获得的EPF单克隆抗体用SDS-PAGE、Western Blot方法进行鉴定. 2.CCK-8、流式细胞术检测EPF单克隆抗体处理后黑色素瘤细胞A-375增殖和凋亡情况,WB检测EPF单克隆抗体处理后黑色素瘤细胞A-375EPF蛋白表达的变化情况. 3.建立黑色素裸鼠移植瘤模型,分为EPF单抗腹腔注射组、EPF单抗皮下注射组、对照组,分别给药处理后,每3天测量计算移植瘤的体积,绘制肿瘤生长曲线,停药后第9天将全部裸鼠处死,剥取肿瘤称重计算抑瘤率,留取肿瘤样本免疫组化和WB检测EPF蛋白表达变化情况. 结果: 1.成功制备出EPF单克隆抗体,SDS-PAGE结果显示清晰正确的条带,WB结果显示EPF单抗有良好的抗原匹配性. 2.CCK-8结果发现,0.2,0.4,0.8mg/ml EPF单抗对A-375细胞抑制作用明显,呈浓度依赖性. 3.流式细胞术检测EPF单抗对A-375细胞的凋亡实验结果显示,0.2,0.4,0.8mg/ml EPF单抗对A-375细胞的促凋亡作用要强于正常对照组. 4.WB结果显示,EPF单抗作用于A-375细胞后,EPF蛋白的表达量明显下调. 5.成功构建了A-375黑色素裸鼠移植瘤模型,移植瘤生长曲线结果显示腹腔给药组移植瘤生长速度慢于皮下给药组和对照组,但差异无统计学意义(P>0.05). 6.腹腔给药组裸鼠移植瘤瘤重小于皮下给药组和对照组,腹腔给药组抑瘤率为32.1%,皮下给药组抑瘤率为12.5%,腹腔给药组抑瘤率高于皮下给药组,差异无统计学意义(P>0.05). 7.免疫组化和WB结果显示三组裸鼠肿瘤组织EPF蛋白的表达无明显差异. 结论: 1.成功制备出EPF单克隆抗体; 2.EPF单抗可以抑制黑色素瘤细胞A-375的增殖,并促进其凋亡; 3.未发现EPF单抗对黑色素裸鼠移植瘤的生长有抑制作用.