两种硅藻硝酸还原酶的研究

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硝酸还原酶是植物硝酸盐同化还原代谢第一步反应酶,也是关键性限速酶,直接制约依赖硝酸盐为氮源的植物生长发育.利用实验室培养的硅藻高盒形藻和锤状中鼓藻为材料,在实验室条件下分析硝酸还原酶对两种硅藻生长的影响.更好地理解硅藻在海域不同性质的氮盐(硝态氮、铵态氮盐)和光条件下(光强度、光质和光周期)的适应.实验结果表明:两种硅藻NR的活力测定最适温度为15℃,最适pH分别为高盒形藻pH7.6、锤状中故藻pH8.0;两种藻类NR对温度十分敏感,室温下保存,在4h内活性完全丧失;4℃保存8h后,藻后盒形藻和锤状中鼓藻NR活性分别降到24.7%、26.4%;两种硅藻NR都是以NADH为电子供体;对NADH敏感,低浓度NADH限制酶活性,高浓度(>0.2mg)抑制酶活性.光诱导两种硅藻NR的产生.光周期下NR活性表现一定的昼液节律现象,不同的光周期下随光期延长其NR活性峰值移;单位细菌内可溶性蛋白也呈现昼夜节律性变化,其最大值出现在NR活性峰后;不同的光质对两种硅藻NR的诱导效果不同,蓝光诱导效应最佳;不同的光强度诱导可检测的NR的活性不相同,培养室培养两种硅藻在光强1000 lx-2000 lx范围内表现出最大活性,过高或过低都降低NR活性.两种硅藻NR受硝酸盐的诱导,而受铵盐的抑制.硝酸盐诱导NR的表达;铵盐培养藻高盒形藻和锤状中鼓藻,检测不到NR活性,既使加入硝酸盐在短时间内检测不到NR活性;培养液含低浓度(0.25mM)铵盐,NR的表达受到抑制,既使在硝酸盐浓度较高的情况下NR的表达依然受到抑制;铵盐在短时间内(1h)便能导致NR快速失活.两种硅藻NR受光和硝酸盐协同的诱导,两者密切相关.光下低浓度硝态氮盐培养两种藻类NR活性低,而黑暗下高浓度硝态氮盐培养两种藻类NR活性也很低;光照下,高浓度硝态氮盐诱导NR高效表达.
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