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新型隐球酵母(Cryptococcus neoformans)作为一种人类的条件致病真菌,属于担子菌门,主要感染免疫力缺陷的人群,引起致死性脑膜炎等隐球菌病。对该菌的深入研究可以有助于人类揭示其致病机理,从而开发出有效的治疗药物,挽救更多人的生命。本文主要以隐球酵母的small RNA为切入点,探究其在隐球酵母中的部分功能。 RNAi现象广泛存在于生物界,在真菌中的研究由于起步较晚,对其RNAi的机制虽有初步了解,但对其中是否存在microRNA却报道很少。我们从已构建好small RNA靶序列文库中及基因组高通量测序结果中,分别挑选五种小RNA进行干扰性方面的研究,将其插入到URA5基因终止子位点,在4500FOA菌株中探究其功能,从而发现部分小RNA具有干扰作用,另一部分干扰作用不明显。Real-time PCR结果显示有干扰作用的转化子中URA5基因的转录水平明显下降,进一步证实了这五个小RNA为干扰性sRNA。 CN1转座因子中包含有两个 sRNA,而在Δrdp菌株中,CN1基因表达量升高明显,为野生型的十倍以上。众所周知,RDRP具有级联放大效应,能作用于siRNA使其表达量成倍增加。所以我们猜测CN1基因可能是这两个sRNA的靶基因,为了验证这一假设,我们构建了CN1基因的OSCAR敲除质粒,希望通过基因敲除及回补实验来探究siRNA的靶基因。