sRAGE拮抗AGEs-RAGE介导的小鼠螺旋神经节细胞凋亡的研究

来源 :福建医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:superyoumyhao
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目的:在体外培养条件下研究sRAGE对AGEs-RAGE介导的C57小鼠SGCs凋亡及RAGE受体表达的影响。方法:取新生3-5天的C57BL/6J小鼠,光学显微镜下解剖获得双侧蜗轴后,利用机械分离+化学消化法分离出SGCs,并进行体外培养。将培养5天的SGCs用4%多聚甲醛室温固定30min,以小鼠抗神经微丝蛋白抗体(NF200)为一抗,按照免疫荧光法对所培养细胞进行免疫细胞荧光染色,对SGCs作出鉴定。将培养第5天的细胞随机分成8个组,一个空白对照组、4个试验组组加入浓度100mg/L的AGEs,2小时后再分别加入不同浓度小鼠sRAGE(50mg/L,100mg/L,150mg/L)和3个不同浓度(50mg/L,100mg/L,150mg/L)的sRAGE单独作用组,采用原位末端标记技术(TUNEL)检测培养24小时后的凋亡率,在荧光显微镜下观察相同浓度AGEs、不同浓度的sRAGE作用下对培养的SGCs凋亡的影响并计数。采用实时荧光定量逆转录PCR(Real time RT-PCR)方法检测相同浓度AGEs下、不同浓度的sRAGE作用后SGCs细胞膜上RAGE的m RNA的表达,数据分析由SPSS统计学软件完成。结果:原代培养SGCs成功,获得足够数量以及活性良好的SGCs,小鼠抗神经微丝蛋白抗体染色显示胞体及轴突染色阳性,呈绿色荧光,集中于胞体处,轴突染色浅。sRAGE加入含有AGEs的SGCs,可以减少SGCs的凋亡,且随着sRAGE浓度的增加,细胞凋亡逐渐减少。SGCs膜上RAGE受体的表达随着sRAGE浓度的增加而减弱。结论:sRAGE可以减少AGEs-RAGE作用下的SGCs的凋亡,并且可以减少膜上RAGE受体的表达,这个过程可能与sRAGE在细胞外竞争性结合AGEs导致胞外AGEs浓度减少有关。
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