桑叶生物碱酶法提取、分离及其功能研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nolva
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有研究表明,桑叶生物碱是桑叶降血糖的重要活性成分,具有降血脂、抗肿瘤、抑制变形链球菌生长、抗病毒等功效。因此本研究从黑曲霉产果胶酶和纤维素酶出发,采用酶辅助提取和离子交换树脂纯化桑叶总生物碱,通过体外模拟胃消化试验,研究通过不同纯化步骤纯化的桑叶生物碱降糖、降脂及抗氧化作用。(1)通过发酵黑曲霉产纤维素酶和果胶酶,并以单因素试验结果为基础,运用响应面法优化黑曲霉SH312-26-19产果胶酶的发酵条件。结果显示,黑曲霉最适发酵条件为培养基中麸皮添加量为11.0 g,发酵时间为4 d,发酵温度为30℃,该黑曲霉产果胶酶活力达到(2518.69±19.34)U/m L,纤维素酶酶活为(119.39±8.32)U/m L。(2)对比了水提、酶提、超声以及酶和超声联合提取方式对桑叶总生物碱质量比的影响,选择酶提为桑叶总生物碱的提取方式,通过响应面法优化桑叶中生物碱酶法提取(AL1)的最佳工艺条件为:料液比为0.0435 g/m L,酶浓度为1077 U/m L,酶处理温度50℃。此条件下桑叶总生物碱质量比最高,为(7.537±0.28)mg/g。(3)为提高桑叶生物碱的纯度,研究了732型阳离子树脂对桑叶生物碱的纯化(AL2),并进行了纯化单因素试验,得出最佳工艺条件为:洗脱液浓度为0.5 mol/L,洗脱速度为1 m L/min,上样浓度为0.1 g/m L(以桑叶计)。进一步地,在纯化介质为717型阴离子树脂下,进行了桑叶总生物碱的进一步纯化(AL3)。经三步提取纯化,AL1、AL2、AL3中桑叶总生物碱质量比分别为7.537 mg/g,4.97 mg/g,1.87 mg/g,真空冷冻干燥后,1-脱氧野尻霉素(DNJ)纯度分别为2.46%,38.3%和61%。(4)经酶提醇沉、酶提醇沉后通过阳离子交换树脂分离纯化、酶提醇沉通过阳离子交换树脂纯化后再通过阴离子交换树脂纯化后,浓缩至50 m L,此为ALY1、ALY2、ALY3,研究了在模拟胃消化体系中3种桑叶生物碱DPPH自由基清除率、羟自由基清除率,对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及降脂作用的变化规律。结果表明,3组桑叶生物碱在胃消化过程中,DPPH清除率均呈现先增加后降低的趋势,且ALY2组清除率最高,在消化1 h时,清除率为4.59μg Vc/m L md。3组生物碱羟自由基清除率均随胃消化过程逐渐降低;在抑制α-葡萄糖苷酶的活性方面,3组桑叶生物碱抑制活性均保持平稳,ALY2组抑制率最高,在消化2.0 h时,抑制率为81.6%;3组桑叶生物碱中ALY2组对胆固醇和胆酸盐的吸收能力最强,胆固醇吸附量和胆酸盐吸附率分别达到0.21 mg/m L和43%。通过优化黑曲霉发酵条件产出的果胶酶和纤维素酶作用于桑叶细胞壁,提高桑叶生物碱的提取率,采取了阳离子交换树脂和阴离子交换树脂进行桑叶生物碱的分离纯化,获得了纯度较高的桑叶生物碱,并比较了3组生物碱在模拟胃消化过程中的DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、降糖和降脂的作用。本试验对开发新型功能性降糖、降脂保健品有一定的参考意义和实用价值。
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