论文部分内容阅读
目的:猪牙皂具有“通关开窍，祛痰”功效用于治疗脑中风，初步探究猪牙皂“通关开窍，祛痰”功效的相关物质基础和猪牙皂有效组分治疗缺血性脑中风的相关作用机制。
方法:经文献研究和预试验发现，猪牙皂含有皂苷、黄酮、挥发油等成分。①采用前期研究的提取和纯化工艺(回流提取法和大孔树脂吸附法)，提取猪牙皂总皂苷。采用正交试验和星点试验设计优选猪牙皂总黄酮的提取工艺，采用大孔树脂吸附法对猪牙皂总黄酮进行纯化，并考察其纯化工艺参数，采用优选的纯化工艺纯化猪牙皂总黄酮获得纯化物。采用CO2超临界流体萃取技术萃取得到猪牙皂中挥发油。②通过小鼠常压缺缸缺氧试验评价猪牙皂不同组分对小鼠耐缺氧缺血强度，通过测量正常、病理生理状态下小鼠脑组织中的伊文思蓝(EB)含量，评价猪牙皂不同组分对小鼠血脑屏障通透性(BBB)的影响。③建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型，分别在手术前测量大鼠头表面温度，手术后再灌注0、2、4、6、22h，测量大鼠头部表面温度，于0、2、4、22h测量大鼠体重，于缺血再灌注4小时后，进行神经功能评分，再灌注22h小时后，测量各组大鼠脑水肿。④采用ELISA法测定大鼠脑缺血侧脑组织及血清中白介素-1β(IL-1β)，IL-6，肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量，使用紫外分光度计测量脑组织及血清中SOD、MDA、NO、NOS，及Ca2+含量。⑤采用HE染色法观察大鼠脑缺血再灌注损伤中海马组织中的病理情况。
结果:①猪牙皂经提取纯化后，猪牙皂总皂苷的纯度为37％，猪牙皂总黄酮纯度为32％，猪牙皂挥发油经超临界流体萃取得率为1.77％。②总皂苷可以显著延长小鼠缺氧条件下存活时间及小鼠断头后喘息时间，降低正常生理状态下小鼠脑组织中的伊蓝斯文(EB)含量，猪牙皂总黄酮对延长小鼠缺氧条件下存活时间及小鼠断头后喘息时间不显著。猪牙皂挥发油对生理及病理状态下脑组织中的EB含量具有显著提升，对小鼠缺氧条件下延长小鼠存活时间及小鼠断头后喘息时间无显著作用。③猪牙皂不同组分对脑缺血再灌注不同时间点的体温及体重影响，均呈现体温上升及体重下降的趋势。④通过测量大鼠血清及脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD、MDA、NO、NOS、Ca2+含量，与模型组比发现猪牙皂中皂苷类成分及不同组分配伍可以减少炎症因子的含量及MDA、NO、NOS浓度，增加超氧化物SOD表达。⑤HE病理染色的结果表明，神经细胞核周围神经纤维水肿，锥体细胞排列紊乱，锥体细胞出现明显的细胞变性甚至坏死，可以认为假手术组和阳性对照组脑组织病理损伤较轻。与假手术组比皂苷组少严重，模型组、皂苷组、挥发油组和挥发油+黄酮+皂苷组病变均较为严重。
结论:①猪牙皂总黄酮的提取纯化工艺稳定，可行。②猪牙皂总皂苷、挥发油经鼻腔给药对小鼠常压耐缺氧缺血及正常病理生理状态下血脑通透性影响较大，猪牙皂总皂苷及挥发油类成分与猪牙皂的“通关开窍，醒脑复神”有一定的关系。③猪牙皂不同组分经鼻腔给药大鼠缺血性脑中风试验研究发现，猪牙皂总皂苷和挥发油抑制脑水肿效果比较显著，并可以降低脑组织与血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA、NO、NOS的含量，且增加SOD的含量。说明猪牙皂总皂苷和挥发油具有保护脑缺血再灌注损伤的作用机制可能与其抗炎症及抗氧化作用相关。④猪牙皂不同组分经鼻腔给药后HE病理染色结果显示皂苷类成分对脑组织的局部病变具有减轻趋势。
方法:经文献研究和预试验发现，猪牙皂含有皂苷、黄酮、挥发油等成分。①采用前期研究的提取和纯化工艺(回流提取法和大孔树脂吸附法)，提取猪牙皂总皂苷。采用正交试验和星点试验设计优选猪牙皂总黄酮的提取工艺，采用大孔树脂吸附法对猪牙皂总黄酮进行纯化，并考察其纯化工艺参数，采用优选的纯化工艺纯化猪牙皂总黄酮获得纯化物。采用CO2超临界流体萃取技术萃取得到猪牙皂中挥发油。②通过小鼠常压缺缸缺氧试验评价猪牙皂不同组分对小鼠耐缺氧缺血强度，通过测量正常、病理生理状态下小鼠脑组织中的伊文思蓝(EB)含量，评价猪牙皂不同组分对小鼠血脑屏障通透性(BBB)的影响。③建立大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型，分别在手术前测量大鼠头表面温度，手术后再灌注0、2、4、6、22h，测量大鼠头部表面温度，于0、2、4、22h测量大鼠体重，于缺血再灌注4小时后，进行神经功能评分，再灌注22h小时后，测量各组大鼠脑水肿。④采用ELISA法测定大鼠脑缺血侧脑组织及血清中白介素-1β(IL-1β)，IL-6，肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量，使用紫外分光度计测量脑组织及血清中SOD、MDA、NO、NOS，及Ca2+含量。⑤采用HE染色法观察大鼠脑缺血再灌注损伤中海马组织中的病理情况。
结果:①猪牙皂经提取纯化后，猪牙皂总皂苷的纯度为37％，猪牙皂总黄酮纯度为32％，猪牙皂挥发油经超临界流体萃取得率为1.77％。②总皂苷可以显著延长小鼠缺氧条件下存活时间及小鼠断头后喘息时间，降低正常生理状态下小鼠脑组织中的伊蓝斯文(EB)含量，猪牙皂总黄酮对延长小鼠缺氧条件下存活时间及小鼠断头后喘息时间不显著。猪牙皂挥发油对生理及病理状态下脑组织中的EB含量具有显著提升，对小鼠缺氧条件下延长小鼠存活时间及小鼠断头后喘息时间无显著作用。③猪牙皂不同组分对脑缺血再灌注不同时间点的体温及体重影响，均呈现体温上升及体重下降的趋势。④通过测量大鼠血清及脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、SOD、MDA、NO、NOS、Ca2+含量，与模型组比发现猪牙皂中皂苷类成分及不同组分配伍可以减少炎症因子的含量及MDA、NO、NOS浓度，增加超氧化物SOD表达。⑤HE病理染色的结果表明，神经细胞核周围神经纤维水肿，锥体细胞排列紊乱，锥体细胞出现明显的细胞变性甚至坏死，可以认为假手术组和阳性对照组脑组织病理损伤较轻。与假手术组比皂苷组少严重，模型组、皂苷组、挥发油组和挥发油+黄酮+皂苷组病变均较为严重。
结论:①猪牙皂总黄酮的提取纯化工艺稳定，可行。②猪牙皂总皂苷、挥发油经鼻腔给药对小鼠常压耐缺氧缺血及正常病理生理状态下血脑通透性影响较大，猪牙皂总皂苷及挥发油类成分与猪牙皂的“通关开窍，醒脑复神”有一定的关系。③猪牙皂不同组分经鼻腔给药大鼠缺血性脑中风试验研究发现，猪牙皂总皂苷和挥发油抑制脑水肿效果比较显著，并可以降低脑组织与血清中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA、NO、NOS的含量，且增加SOD的含量。说明猪牙皂总皂苷和挥发油具有保护脑缺血再灌注损伤的作用机制可能与其抗炎症及抗氧化作用相关。④猪牙皂不同组分经鼻腔给药后HE病理染色结果显示皂苷类成分对脑组织的局部病变具有减轻趋势。