人参皂苷RG3对脉络膜新生血管的抑制作用研究

来源 :锦州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:longyouxi
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目的本研究旨在通过体外、体内实验探讨人参皂苷RG3对脉络膜新生血管的抑制作用,并探究其可能发生的机制。方法体外实验:细胞分别加入DMSO对照溶液(2μg·ml-1)和人参皂苷RG3溶液(80.0μg·ml-1),通过MTT、细胞划痕实验、小管形成实验检测细胞增殖迁移和小管形成情况;TUNEL染色、流式细胞仪等方法检测细胞凋亡情况;通过western blot、细胞免疫荧光染色等检测VEGF、p-Akt、p-Erk蛋白表达情况。体内实验:选取雄性C57BL/6J小鼠20只,20只眼,采用随机分组的方法分为对照组和人参皂苷RG3组,皮下注射预处理给药一周,半导体激光诱导建立脉络膜新生血管模型,于光凝后7天、14天、21天、28天进行荧光素钠眼底血管造影,观察CNV形成和渗漏情况;通过Westrn blot检测造模3天后小鼠眼球内VEGF、p-Akt、p-Erk等蛋白表达情况。结果体外实验:1.MTT结果显示人参皂苷RG3处理HUVECs 12小时后,与DMSO对照组相比,人参皂苷RG3组HUVECs的吸光度值降低,差异有统计学意义(P<0.01),人参皂苷RG3对HUVECs的增殖有抑制作用;2.细胞划痕实验结果显示DMSO对照组细胞明显向划痕处无细胞区迁移生长,而人参皂苷RG3组细胞迁移生长则不明显,差异有统计学意义(P<0.05),证明人参皂苷RG3对内皮的迁移有抑制作用;3.小管形成实验结果显示DMSO对照组小管形成数目高于人参皂苷RG3组,差异有统计学意义(P<0.01),证实人参皂苷RG3对内皮细胞小管形成有抑制作用;4.TUNEL染色结果显示人参皂苷RG3组HUVECs的阳性表达高于DMSO对照组,流式细胞仪结果也显示人参皂苷RG3组HUVECs的凋亡率高于DMSO对照组;细胞免疫荧光染色和Western blot对于凋亡蛋白Cleaved caspas-3的检测结果显示,人参皂苷RG3组Cleaved caspas-3蛋白的相对表达量高于DMSO对照组,表明人参皂苷RG3可通过调节Cleaved caspas-3蛋白的表达诱导内皮细胞凋亡;5.细胞免疫荧光染色和Western blot结果可见人参皂苷RG3组与DMSO对照组相比,VEGF、p-Akt、p-Erk的相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P<0.01),证明人参皂苷RG3抑制VEGF、p-Akt、p-Erk的表达。体内实验:1.眼底荧光素钠血管造影显示两组均有荧光素钠渗漏和脉络膜新生血管(CNV)的形成,随着时间的推移,两组荧光素钠渗漏强度均有所减轻,但在相同时间点人参皂苷RG3组的荧光渗漏面积和强度均低于DMSO对照组,证明人参皂苷RG3对脉络膜新生血管的形成和渗漏有抑制作用;2.Western blot结果显示,激光造模3天后人参皂苷RG3组体内VEGF、p-Akt、p-Erk蛋白的相对表达量低于空白组和DMSO对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。证实人参皂苷RG3抑制小鼠体内VEGF、p-Akt、p-Erk等蛋白的表达。结论1.人参皂苷RG3通过降低VEGF、p-Akt、p-Erk等蛋白的表达,抑制HUVECs的增殖和迁移,并诱导HUVECs的凋亡。2.人参皂苷RG3可抑制脉络膜新生血管的形成,降低脉络膜毛细血管的通透性。3.人参皂苷RG3可以作为潜在的有效药物,用于湿性AMD的临床辅助治疗。
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