【摘 要】
：
研究背景和目的骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）的成骨分化能力减弱,成脂分化能力增强,是骨质疏松症的重要发病机制之一。环状RNA（circular RNA,circRNA）可在生物体内稳定存在,并可通过“分子海绵”作用特异性吸附微小RNA（micro RNA,miRNA）调节BMSCs分化潜能。最近多项研究证实,circRNA在骨质
论文部分内容阅读
研究背景和目的骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）的成骨分化能力减弱,成脂分化能力增强,是骨质疏松症的重要发病机制之一。环状RNA（circular RNA,circRNA）可在生物体内稳定存在,并可通过“分子海绵”作用特异性吸附微小RNA（micro RNA,miRNA）调节BMSCs分化潜能。最近多项研究证实,circRNA在骨质疏松症中存在差异表达,在其疾病进程中可能发挥着重要作用。本课题拟通过研究circRNA在BMSCs分化调控中的作用和机制,从而为骨质疏松症提供新的诊疗靶点。方法1、利用qRT-PCR技术检测骨质疏松患者及健康对照人群血液标本中感兴趣circRNA表达水平,选用circRBM23作为后续研究靶点。2、利用成骨及成脂分化诱导培养基,对BMSCs进行成骨、成脂诱导分化,收集不同诱导时间段的细胞提取RNA,利用qRT-PCR技术分析其中circRBM23表达情况。3、利用sanger测序检测circRBM23特异性成环位点;琼脂凝胶电泳检测其成环特性;使用RNase R酶评估circRBM23稳定性;利用核浆分离实验与荧光原位杂交（Fluorescent In Situ Hybridization,FISH）实验分析 circRBM23 亚细胞定位情况。4、在稳定过表达/沉默circRBM23的BMSCs细胞株及对照细胞株中,应用CCK8实验、平板克隆形成实验、EdU染色、划痕实验、茜素红S染色、油红O染色、qRT-PCR等实验检测circRBM23对BMSCs增殖、迁移、成骨成脂分化等能力的影响。5、利用生物信息学分析预测circRBM23潜在下游结合microRNA（miRNA）,依据评分结果,选取miR-338-3p作为下游靶点;利用双荧光素酶报告基因实验和RAP实验检测两者结合关系;采用FISH实验观察两者共定位关系。6、利用Rescue实验探究miR-338-3p对circRBM23功能的影响;Western blot检测下游靶点RUNX2蛋白表达水平。7、通过双侧卵巢切除术建立去势小鼠模型,向去势小鼠骨髓腔中注射过表达circRBM23的BMSCs及对照细胞,利用microCT、免疫组化及H＆E染色,体内评估circRBM23对BMSCs成骨、成脂分化能力的影响。研究结果1、circRBM23在骨质疏松患者中低表达,其表达水平随BMSCs成骨诱导分化时间增加而增加,随BMSCs成脂诱导分化时间增加而减少。2、circRBM23主要定位于细胞质中,其具备环状RNA相关特性。3、过表达circRBM23可促进BMSCs增殖、迁移及成骨分化能力,抑制其成脂分化能力,沉默circRBM23后效果相反。4、circRBM23可与miR-338-3p直接结合并抑制miR-338-3p对RUNX2蛋白翻译的阻遏作用。5、过表达miR-338-3p可逆转过表达circRBM23造成的生物学影响。研究结论1、circRBM23在骨质疏松症患者中低表达,其表达水平与BMSCs成骨分化水平正相关,与成脂分化水平负相关。2、circRBM23可在体内、体外水平均促进BMSCs的成骨分化,抑制其成脂分化。3、circRBM23可通过吸附miR-338-3p,上调RUNX2蛋白表达量,最终对BMSCs的成骨成脂分化产生影响。
其他文献
作为可再生能源的革命性技术,可充电锂离子电池在近几十年得到了广泛研究。负极材料是锂离子电池不可或缺的一部分,对锂离子电池的性能有重要的影响。然而,以石墨为负极的传统锂离子电池已经无法满足不同应用场景的需求（如电动汽车和大型电源）。为了提高电池的能量密度、功率密度和稳定性来满足当代社会发展的需求,科学家们在设计合成高比容量、长循环寿命的可替代负极材料方面开展了大量的工作。在钒氧化物基材料中,钒离子具
研究背景单肺通气（One Lung Ventilation,OLV 或 Single Lung Ventilation,SLV）是一种依赖于使用双腔气管插管来使一侧肺通气,而另一侧肺因为被动放气而塌陷的通气方法。但是,单肺通气过程中肺断气复气可以增加术后急性肺损伤（Acute Lung Injury,ALI）的发生率,ALI造成的肺损害是胸科手术后死亡的主要原因。到目前为止,单肺通气过程中肺断气复
DNA损伤即DNA物理状态或化学结构异常,它是癌症、衰老相关疾病的重要病理环节之一,也是紫外/电离辐射、化疗药物等导致机体细胞损伤的重要因素。因此,寻找发现能减少DNA损伤发生或促进DNA损伤修复的活性化合物,已成为药物筛选领域的热点。然而,现有的DNA损伤评价方法大多依赖于凝胶电泳、放射性标记等常规分析方法,存在通量低、灵敏度不足等问题。随着仪器分析技术的进步,以显微成像结合荧光标记为特点的高内
近几十年来,全球范围内极端降水事件发生的频率和强度日益增加,造成的危害越来越严重,使得极端降水成为国内外气象和水文等领域研究的一项重要课题。极端降水研究中的水文频率分析方法,可获得特定频率的降雨估计值及其时空变化规律,为防洪工程规划及暴雨洪涝灾害的风险评估和预警提供依据,以减少灾害带来的损失。近年来,我国的频率分析方法研究得到了一定的发展,但在实际防洪规划设计和暴雨洪涝灾害预警业务中常用的频率分析
精准高效的降水估计与预报对于农业、交通、水利、电力等多个行业都具有重要意义。得益于全球气象卫星监测的精密化,气象卫星观测数据正在持续爆炸式增长,如何有效挖掘海量卫星观测数据中隐藏的重要降水信息是提升卫星降水估计和预报性能的一大挑战。对于卫星降水估计,如何建模高时空分辨率的卫星观测信息与降水之间的非线性关系是提升降水估计的时效性以及精确性的关键。对于卫星降水预报,如何从卫星观测序列中提取大气运动演变
随着科学技术不断地发展和进步,社会已经正式迈入了网络时代,人们需要接触和处理的复杂网络也日益增多。复杂网络作为一种特殊的数据表现形式,作为复杂系统的结构形态,它由节点和边构成,是对复杂系统进行抽象地描述。从拓扑的角度出发,图作为一种工具,其不变量的许多性质在研究复杂网络拓扑结构的性质时起到至关重要的作用。图不变量有很多种,其中最主要的有拓扑指数、图能量以及图熵等,它们可以很好地反映出复杂网络拓扑结
研究背景早产儿视网膜病变（retinopathy of prematurity,ROP）是一种发生在早产儿和低体重儿的视网膜血管增生性疾病,是全球婴幼儿失明的主要原因之一,定期筛查、早期发现并及时治疗可防止视力损害。建立用于识别ROP高风险新生儿的预测模型,有望减少不必要的筛查次数。ROP常并发于其他早产儿并发症,眼底筛查可能是了解这些疾病的窗口。利用深度学习对早产儿的眼底图像进行分析,可挖掘RO
X射线多谱CT成像相较于传统CT成像,引入了多个能量下的物质衰减信息,能够抑制“能谱平均”的硬化伪影,实现材料组分及微观结构的定量表征,对新材料、新药物、新能源的研发与性能测试具有重要意义。基于“鸡尾酒会”盲分离的多谱CT成像,避免了现有多谱CT成像存在的模型复杂、能谱已知等局限性,但是在多谱伪影去除、噪声抑制以及窄能谱能量指向性上仍存在问题,影响了定量表征精度。为此,本文在现有多谱盲分离方法基础
研究背景主动脉瓣钙化疾病是老年人常见的瓣膜疾病。目前尚无药物能明显改善该疾病,进展性主动脉瓣钙化疾病患者在疾病晚期出现主动脉狭窄、左心室肥大、心力衰竭,严重的甚至会出现休克和猝死。主动脉瓣钙化疾病进展缓慢,瓣膜的慢性炎症在病程中起重要作用。病变的主动脉瓣中有单核细胞浸润。可溶性细胞外基质蛋白可诱发主动脉瓣膜间质细胞中与瓣膜钙化相关的病理过程。而matrilin-2作为具有适配器蛋白功能的非胶原性细
功率密度提升是新一代动力发展的必然趋势。主轴承组合结构作为柴油机重要的主承力结构之一,主要是由机体、主轴承盖、主轴瓦、曲轴以及若干连接螺栓组成。由于功率密度提升导致的曲轴与主轴承耦合变形增加、典型零部件强度失效等可靠性问题都对整机可靠性起到不可忽略的影响。对于主轴承组合结构协调匹配设计,“协调”是设计目标,指在外界载荷作用下主轴承组合结构呈现强度协调（机体和主轴承盖强度安全系数提高）、变形协调（主