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目的
通过研究β-榄香烯(β-elemene，β-ELE)对人膀胱癌细胞增殖、周期的作用以及β-榄香烯联合顺铂对膀胱癌T24细胞凋亡、线粒体膜电位、ROS/AMPK信号通路相关蛋白的影响，探讨β-榄香烯在协同膀胱癌顺铂(Cis-dichlorodiammine platinum，CDDP)化疗中的作用和机制，为膀胱癌的治疗提供新的思路。
方法
1.应用CCK-8法检测β-榄香烯对各种膀胱癌细胞以及人膀胱上皮永生化细胞增殖活力的影响并计算半数最大抑制浓度(IC50)值；2.应用流式细胞技术检测β-榄香烯对膀胱癌T24、5637细胞周期的影响；Westernblot实验检测周期相关蛋白的表达情况；3.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞，CCK-8法检测细胞活力的变化；流式细胞技术和Hoechst染色实验检测细胞凋亡的情况；Westernblot实验检测凋亡相关蛋白的变化；4.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞，JC-1荧光探针和流式细胞技术检测线粒体膜电位变化；Westernblot检测线粒体凋亡相关蛋白的变化；5.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞以及应用ROS清除剂NAC后，DCFH-Da和流式细胞技术测定细胞内ROS含量；Westernblot实验检测磷酸化AMPK蛋白的表达；应用AMPK的特异性抑制剂compoundC后，流式细胞技术检测线粒体膜电位和细胞凋亡情况的变化；Westernblot实验检测凋亡相关蛋白的变化。
结果
1.β-榄香烯以浓度依赖的方式抑制膀胱癌细胞和人膀胱上皮永生化细胞的增殖；2.β-榄香烯以浓度依赖的方式抑制T24和5637细胞周期，将细胞阻滞在G0/G1期，S期细胞比例显著降低；Westernblot实验显示，β-榄香烯处理T24细胞后，p-STAT3、cyclinD1、CDK4、CDK6的表达随着β-榄香烯浓度增高而逐渐降低，而p21、p27的表达逐渐升高；3.相较于顺铂组，联合β-榄香烯和顺铂处理使T24细胞存活率更低，细胞凋亡率更高，Cleavedcaspase-3和CleavedPARP的表达升高；4.联合β-榄香烯和顺铂处理T24细胞，JC-1荧光探针指示红色荧光/绿色荧光下降的比例更高，Cleavedcaspase-9、Bax和胞浆Cytochromec的表达量上调，Bcl-2的表达量下调，线粒体膜电位下降；5.DCFH-Da和流式细胞仪测定发现联合用药组中，细胞内的ROS水平更高；Westernblot显示，联合用药组中p-AMPK表达升高，ROS清除剂NAC可抑制其表达；应用compoundC抑制AMPK通路后，Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-9、胞浆Cytochrome-c、Cleavedcaspase-3和CleavedPARP的表达也受到逆转，细胞凋亡减少。
结论
β-榄香烯能抑制膀胱癌细胞增殖，诱导T24和5637细胞G0/G1阻滞，其可能和AKT、STAT3信号通路有关。另外，β-榄香烯通过激活ROS-AMPK通路增强顺铂诱导的T24细胞线粒体凋亡。这提示β-榄香烯有助于提高膀胱癌细胞对顺铂的化疗敏感性，为缓解甚至逆转膀胱癌化疗耐药现象提供新的思路。
通过研究β-榄香烯(β-elemene，β-ELE)对人膀胱癌细胞增殖、周期的作用以及β-榄香烯联合顺铂对膀胱癌T24细胞凋亡、线粒体膜电位、ROS/AMPK信号通路相关蛋白的影响，探讨β-榄香烯在协同膀胱癌顺铂(Cis-dichlorodiammine platinum，CDDP)化疗中的作用和机制，为膀胱癌的治疗提供新的思路。
方法
1.应用CCK-8法检测β-榄香烯对各种膀胱癌细胞以及人膀胱上皮永生化细胞增殖活力的影响并计算半数最大抑制浓度(IC50)值；2.应用流式细胞技术检测β-榄香烯对膀胱癌T24、5637细胞周期的影响；Westernblot实验检测周期相关蛋白的表达情况；3.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞，CCK-8法检测细胞活力的变化；流式细胞技术和Hoechst染色实验检测细胞凋亡的情况；Westernblot实验检测凋亡相关蛋白的变化；4.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞，JC-1荧光探针和流式细胞技术检测线粒体膜电位变化；Westernblot检测线粒体凋亡相关蛋白的变化；5.联合β-榄香烯和顺铂处理细胞以及应用ROS清除剂NAC后，DCFH-Da和流式细胞技术测定细胞内ROS含量；Westernblot实验检测磷酸化AMPK蛋白的表达；应用AMPK的特异性抑制剂compoundC后，流式细胞技术检测线粒体膜电位和细胞凋亡情况的变化；Westernblot实验检测凋亡相关蛋白的变化。
结果
1.β-榄香烯以浓度依赖的方式抑制膀胱癌细胞和人膀胱上皮永生化细胞的增殖；2.β-榄香烯以浓度依赖的方式抑制T24和5637细胞周期，将细胞阻滞在G0/G1期，S期细胞比例显著降低；Westernblot实验显示，β-榄香烯处理T24细胞后，p-STAT3、cyclinD1、CDK4、CDK6的表达随着β-榄香烯浓度增高而逐渐降低，而p21、p27的表达逐渐升高；3.相较于顺铂组，联合β-榄香烯和顺铂处理使T24细胞存活率更低，细胞凋亡率更高，Cleavedcaspase-3和CleavedPARP的表达升高；4.联合β-榄香烯和顺铂处理T24细胞，JC-1荧光探针指示红色荧光/绿色荧光下降的比例更高，Cleavedcaspase-9、Bax和胞浆Cytochromec的表达量上调，Bcl-2的表达量下调，线粒体膜电位下降；5.DCFH-Da和流式细胞仪测定发现联合用药组中，细胞内的ROS水平更高；Westernblot显示，联合用药组中p-AMPK表达升高，ROS清除剂NAC可抑制其表达；应用compoundC抑制AMPK通路后，Bax、Bcl-2、Cleavedcaspase-9、胞浆Cytochrome-c、Cleavedcaspase-3和CleavedPARP的表达也受到逆转，细胞凋亡减少。
结论
β-榄香烯能抑制膀胱癌细胞增殖，诱导T24和5637细胞G0/G1阻滞，其可能和AKT、STAT3信号通路有关。另外，β-榄香烯通过激活ROS-AMPK通路增强顺铂诱导的T24细胞线粒体凋亡。这提示β-榄香烯有助于提高膀胱癌细胞对顺铂的化疗敏感性，为缓解甚至逆转膀胱癌化疗耐药现象提供新的思路。