小麦7DL染色体臂简单重复序列(SSR)的分析以及分子标记的开发、验证和多态性研究

来源 :西北农林科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shahua001
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本研究首次通过高通量测序技术获得小麦7号同源群D组染色体长臂的高覆盖度普查序列,并用Sanger测序技术获得一些BAC末端序列,从中分析了 SSR位点信息,并大规模的开发了 7号D组染色体特异的SSR分子标记并进行多态性研究。利用细胞流式仪分离小麦品种中国春7DL染色体的染色体DNA,然后利用Illumina Hiseq2000测序平台进行高通量测序,共获得14.54 Gb的序列,用Velvet软件进行拼接后,共获得161,061个片段,其中每个片段长度不少于200bp,共223Mb,数据见http://www.wheatgenome.info.。利用Sanger测序技术对96个BAC克隆测序共成功获得47条BAC末端序列,7DL普查序列和BAC末端序列SSR位点以及SSR分子标记通过SSR Locator软件获得,普查序列161,061个片段中共得到23,272个SSR位点,其中重复单元为2个的SSR重复元件最多(10562)个占总数的45.39%,重复单元为1个的SSR重复元件居第二位(6957),占总重复单元数目的29.89%,然后分别是3个重复单元(5250,22.56%)、4个重复单元(420,1.8%)、6个重复单元(49,0.21%),以及5个重复单元(34,0.15%)。所有预测到的SSR位点中11,656个可以设计引物。47个BAC末端序列共获得SSR位点32个,其中重复单元为2个的SSR重复元件1个,重复单元为1个的31个,32个SSR位点中有19个可以设计引物。从7DL普查序列获得的11,656个引物位点中随机选取33个,7DL BAC末端序列获得的19个SSR引物位点中随机选取6个,用Primer premier5.0软件设计引物,在20个小麦品种(Kennedy,Sunco,and Westoniq(澳大利亚);Barra and Lampo(意大利);Shango(英国);Antti,Market,and Soissons(法国);Boomer,Campari and Korund(德国);SD05004,SD96240-3-1,T03A0148,and Wheaton(美国);海盐种,川麦 42,小偃6号和中国春(中国))中进行SSR引物验证以及多态性分析,并用2个中国春缺体材料(N7DT7A和N7DT7B)作对照来验证SSR引物的特异性,最后用POPGENE v 1.3.1软件分析多态性。结果显示7DL普查序列的33个SSR引物中有30个可以扩出条带,26个SSR引物可以扩出目的条带,并且有18个有多态性,且都是7D特异的SSR引物,7DL BAC末端序列的6个SSR引物中有2个可以扩出目的条带,并且是7D特异SSR引物,但均没有多态性。木研究首次通过Illumina Hi Seq2000高通量测序技术来获得单个小麦染色体臂的特异性分子标记,开创了新的特异分子标记开发途径,这些特异性分子标记可以为饱和小麦7DL遗传图谱、构建小麦遗传连锁图谱以及基因定位及图位克隆做贡献。
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