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目的对比常用牙科合金去除前后外周静脉血以及肝肾中金属离子种类和浓度的变化,从而系统地比较常用牙科合金去除前后对外周静脉血以及肝肾细胞的生物学影响,为如何改善常用牙科合金的生物相容性提供实验基础,并为已行牙科合金修复体修复患者治疗计划的制定提供参考依据。方法本课题将根据ISO 10993标准构建金黄地鼠动物研究模型,分别采用镍铬(Nickel-chromium,Ni-Cr),钴铬(Cobalt-chromium,Co-Cr),钛金属(Commercially pure titanium,CP-Ti),钯基(Palladium-based,Pd-based)和金铂(Gold-platinum,Au-Pt)合金等常用牙科合金持续刺激金黄地鼠口腔黏膜12周,此期间应用电感耦合等离子体质谱仪(Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)检测各时间点(0d、1w、2w、4w、8w、12w)外周静脉血中金属离子的种类、水平,观察是否出现平台期(连续3个时间点,各组所有金属离子总浓度无显著变化)或高峰点;再于平台期初始点或高峰点去除各组一半的合金,根据随机区组法分为去除组(Removal group,R group)和不去除组(Non-Removal group,NR group),之后继续检测(去除后1w、2w、4w、8w、12w,即R1w、R2w、R4w、R8w等),直至去除组再次进入平台期或恢复到正常值,从而确定终末点。本课题将分别于高峰点和终末点应用ICP-MS检测金黄地鼠外周静脉血以及肝肾中金属离子的种类和浓度,在此基础上,采用AO/EB荧光双染法、流式细胞术检测不同种类和浓度的金属离子对外周静脉血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)的凋亡和血清自噬水平的影响,采用HE染色、肝肾功检测、免疫组化、TUNEL法检测等方法检测不同种类和浓度的金属离子对肝肾病理、肝肾功能以及凋亡和自噬的影响。结果1.五种牙科合金均引起外周静脉血中不同程度的金属离子的蓄积,其中Ni-Cr及Co-Cr合金组外周静脉血中的金属离子浓度于2周即达到高峰,随后逐渐下降,去除合金后可使其恢复正常值(R4w)。CP-Ti组外周静脉血中的金属离子浓度于1周即达到高峰,随后逐渐下降,去除合金后可使其恢复正常值(R8w)。Pd-based及Au-Pt合金外周静脉血中的金属离子浓度于12周抵达高峰,随后逐渐下降,去除合金可使其恢复正常值(R12w),但Pd-based合金组尚未恢复。除CP-Ti及Au-Pt合金外,其余牙科合金均造成了肝肾组织中金属离子的蓄积,且去除合金可使蓄积的金属离子排出。2.五种牙科合金去除前后均未起肝肾组织明显的组织病理学改变以及肝肾功异常。3.Ni-Cr及Pd-based合金引起了PBMCs早期凋亡率以及血清自噬水平的上调,同时引起了肝肾细胞凋亡率以及自噬水平的上升,去除合金后可使这些生物学指标恢复正常,但是Pd-based合金组肾细胞的凋亡率以及自噬水平未能恢复。4.Co-Cr合金引起了PBMCs早期凋亡率以及血清自噬水平的上调,同时引起了肝肾细胞凋亡率以及自噬水平的上升,无论是否去除合金,PBMCs的早期凋亡率及肝细胞的凋亡率均有所下降,但PBMCs的早期凋亡率未能恢复到正常水平;去除合金,可使其他生物学指标恢复到正常水平。5.CP-Ti及Au-Pt合金均未对PBMCs、肝肾组织病理、肝肾功能、凋亡及自噬水平造成影响,体现了其良好的生物相容性,但却引起了血清中自噬水平一过性上调,无论是否去除合金,血清中自噬水平均可恢复正常。6.PBMCs的早期凋亡率与外周静脉血中Ni、Cr、Cu、Zn离子的浓度成正相关,血清中p62蛋白浓度与外周静脉血中Ni、Cr、Zn、Pd、Ag离子的浓度成负相关;肝肾细胞的凋亡率与其中Ni、Cr离子浓度成正相关,此外肝细胞的凋亡率还与Cu、Zn离子有关,肾细胞的凋亡率还与Pd离子有关;肝肾组织p62表达量与其中Cr、Ni离子浓度成负相关,此外肾组织的p62表达量还与Pd离子有关。结论1.五种牙科合金均引起外周静脉血以及肝肾组织中金属离子不同程度的一过性蓄积,且均未引起明显的肝肾组织和功能的改变;2.CP-Ti及Au-Pt合金具有良好的生物相容性;3.Ni-Cr,Co-Cr和Pd-based合金引起PBMCs早期凋亡率,血清自噬水平,肝肾细胞凋亡率和自噬水平的一过性增加;4.移除牙科合金可以消除大部分蓄积的金属离子以及生物学改变。