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目的:探讨神经修复后早期大鼠骨骼肌萎缩中骨骼肌细胞凋亡情况。方法:选择健康雄性SD大鼠54只,体重200±10g,随机分为3组,失神经对照组(A组,18只),神经吻合组(B组,18只),正常对照组(C组,18只)。应用10%水合氯醛(0.3ml/100g)对大鼠行腹腔麻醉,麻妥后,A组,于左侧股二头肌前缘肌间隙进入暴露分离坐骨神经,以坐骨神经分为腓总神经和胫神经处以近1.5cm为中点切除上下各0.5cm之坐骨神经,远近两端自然回缩;B组,于相同位置在未经任何处理情况下应用快刀片将坐骨神经截断,随即在手术显微镜下应用10-0医用尼龙线以外膜血管为参照将两断端外膜吻合,神经处理完毕后,应用生理盐水冲洗手术野,逐层闭合,术后未应用抗生素,未对患肢进行固定;C组不做任何处理。分别在2d,14d,28d在A,B,C三组中随机取出6只大鼠,测量体重,应用颈椎脱臼法将其处死,将大鼠左侧腓肠肌自肌肉起止点完整取出,测定腓肠肌肌湿重(GAS)后将其分成两份,一部分(大于200g)加入冰细胞裂解液100μl,应用超声波匀浆仪低温下(4℃)组织裂解。一部分置于4%中性多聚甲醛溶液中固定12小时,随后在不同浓度蔗糖溶液中上行脱水直至沉底。随后,在-20℃条件下,制作腓肠肌横断面冰冻切片,切片厚度15μm,对切片进行封闭(室温下浸入3%H2O2甲醇溶液,10分钟)与通透(冰上浸0.1%TritonX-100柠檬酸钠溶液,2分钟)。随后将冰冻切片置于荧光素(FITC)标记的脱氧核苷酸末端转移酶(TdT酶)混合液中,在37℃避光湿润条件下行60分钟标记反应。同时制备阳性对照样本——切片在脱氧核糖核酸酶I(DNase I)反应液中37℃处理10～30分钟;阴性对照样本——切片在不含有TdT酶的反应液中进行处理。标记反应完毕后,选择4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核进行复染,加入500μL的DAPI工作液(DAPI浓度为1-2μg/mL的甲醛溶液),37℃孵育15分钟,甲醇漂洗后防荧光淬灭封片剂封片。应用激光共聚焦显微镜对切片进行观察,计数凋亡细胞核。将制备好的组织匀浆液转移到1.5mL预冷离心管, 10000转/分,4℃离心5分钟;保留上清液于冰上待用。应用Braford法测定蛋白浓度,当蛋白含量达标后(>2μg/μl),吸取50μL上清液加入50μL反应缓冲液和5μL Caspase-3底物或Caspase-8底物于370C避光孵育4小时,应用荧光分光光度计在波长405 nm处测吸光度值(OD),以不加底物的样本作为阴性对照。通过计算OD反应组/OD阴性对照来确定各组Caspase-3或Caspase-8活化程度。数据以均数±标准差(±s)表示,用SAS统计学软件处理。结果:在SD大鼠神经损伤(离断伤)修复(神经缝合)后早期骨骼肌相对正常神经支配骨骼肌,骨骼肌细胞凋亡现象有所增加,凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-8活性较正常神经支配骨骼肌亦有所上升,但凋亡细胞核数量,Caspase-3和Caspase-8活性均弱于完全失神经骨骼肌。结论:骨骼肌细胞凋亡是SD大鼠周围神经损伤修复后早期骨骼肌萎缩的机制之一,死亡受体信号通路参与到了神经修复后早期骨骼肌凋亡过程中。