目的核黄素/UVA诱导的角膜胶原交联术可以增加胶原纤维的交联度,增强角膜生物力学特性,阻止圆锥角膜、角膜膨隆进展,用于治疗进展期圆锥角膜取得理想效果。研究表明,角膜胶原交联治疗时,若角膜厚度大于400μ m,紫外线不会损伤角膜内皮细胞、晶状体、视网膜等组织。但圆锥角膜是以角膜进行性薄化为特征,晚期患者角膜厚度多低于400μm,从而一定程度限制了该技术在圆锥角膜的应用。研究也证实,低渗核黄素溶液点眼可以增加角膜厚度,可以用于薄角膜患者的治疗；由于核黄素分子量较大,角膜上皮的完整性显著影响核黄素的渗透,影响交联疗效。本研究旨在探讨兔眼去角膜上皮与保留角膜上皮时,核黄素/UVA诱导的角膜交联术后角膜生物力学变化及对其角膜基质细胞的影响。方法1.紫外线照射将兔全麻后开睑器开睑,去上皮组刮除中央7.5mm的角膜中央区域上皮,照射前半小时开始滴0.1%核黄素低渗溶液,角膜测厚仪测量角膜厚度,至厚度超过400μm,于裂隙灯下观察核黄素已进入前房后开始照射。照射时间30min、照射距离50mm、光束直径为7.5mm、波长为370nm,能量密度为3mW/cm2,相当于5.4J/cm2,照射中每2min点一次0.1%核黄素溶液。保留上皮组直接点0.1%低渗核黄素溶液,至角膜厚度大于400u m时开始照射。2.角膜生物力学测试角膜胶原交联术后立即处死兔子,取中央10mm×3mm的长条角膜片,试件在INSTRON试验机上实验,将角膜片垂直夹在上下两端的夹具上,间隔8-10mm。角膜破坏试验：角膜试件拉伸至断裂破坏,根据得出的数据可计算出弹性模量及受测角膜试件所能承载的最大拉力,即最大应力。实验以加载速度2mm/min逐渐增加应力,终止条件为试件被拉断破坏,计算机自动输出数据。3.角膜组织病理学观察切取角膜中央部位组织,石蜡包埋,4μ m切片,进行HE染色观察角膜基质内胶原纤维形态变化情况等。4.角膜细胞的毒性作用取出角膜后用石蜡包埋,做4μ m切片,行TUNEL检测。具体操作步骤依照说明书进行。结果判定：阳性反应为细胞核被染成棕黄色。计数5个随机高倍视野的阳性细胞数,测得的数据以x±S表示。结果1.点0.1%低渗核黄素溶液后,两组兔眼角膜厚度均可增加达到400μ m。2.经交联治疗后,去上皮组角膜试件的最大应力明显高于保留上皮组和对照组(P<0.05),实验组间差异无统计学意义(P>0.05)。弹性模量：E去上皮组织>E保留上皮组>对照组(P<0.05)。3.经交联治疗后,两组间角膜基质纤维未见明显变化,细胞凋亡无统计学差异。结论1.0.1%低渗核黄素溶液点眼,可显著增加角膜厚度,去上皮与保留上皮均可使角膜厚度达到400μm以上的安全照射厚度。2.0.1%低渗核黄素溶液与长波紫外线A可诱导角膜胶原纤维交联度的增加。3.低渗核黄素／紫外线交联可明显增加角膜的生物力学强度,去除上皮后,该作用更加明显。4.低渗核黄素/紫外线交联术后,未见角膜内皮的明显损伤。