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背景:研究表明肿瘤免疫微环境(The tumor immune microenvironment,TIME)中免疫细胞浸润和肿瘤的发生发展以及预后有一定的关系,同时,RNA N6-腺苷甲基化(N6-methyladenosine,m6A)与肿瘤生物学行为也有一定的联系。然而,在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,cc RCC)中,m6A与肿瘤免疫细胞浸润的关系还不是很清楚。目的:本研究旨在分析N6-腺苷甲基化(m6A)相关调节分子与cc RCC免疫细胞浸润之间的关系。方法:本研究从公共数据库下载cc RCC转录组数据、肿瘤突变负荷数据(the tumor mutation burden,TMB)、拷贝数变异数据(copy number variation,CNV)、免疫组化数据和相关的临床信息数据;在既往m6A RNA甲基化研究文献基础上,纳入23个m6A RNA腺苷甲基化调节基因作为主要研究对象。使用R软件包“Consensus Cluster Plus”中的k-means聚类算法,根据m6A调节基因m RNA表达水平,将cc RCC样本进行亚组划分。基于主成分分析算法,我们使用R软件包“factoextra”筛选在亚组分型中起到重要作用的m6A调节基因。使用R软件包“survminer”和“survival”对关键基因和cc RCC患者生存预后之间的关系进行分析。然后,本研究采用R软件包“WGCNA”进行加权基因共表达网络分析。筛选与亚组相关的基因模块后,进行基因本体论(gene ontology,GO)富集分析、基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA),探索与亚组分型相关的潜在生物学功能。采用R软件包“GSVA”中的单样本富集分析(single sample gene set enrichment analysis,ss GSEA)算法,计算cc RCC样本的免疫细胞浸润分数。使用R内置函数,对免疫细胞浸润在cc RCC不同分级、分期等临床特征中的差异进行比较,确定与cc RCC分级、分期等临床特征相关的免疫浸润细胞。使用Spearman相关性分析算法,在不同亚组中,计算亚组中关键基因和免疫细胞之间的相关性,从而探究关键基因和免疫细胞浸润之间潜在的关联。采用相关性分析的方法,筛选与关键m6A RNA腺苷甲基化基因相关的基因,并在HPA数据库免疫组化结果中,验证筛选基因和关键基因的关系。结果:本研究从TCGA数据库中下载607例cc RCC相关样本(包括73例癌旁组织样本,534例肿瘤样本)。从GEO数据库中下载GSE53757和GSE36895这两个cc RCC样本数据集。分析发现一部分m6A调节分子表达水平在cc RCC不同分级、分期等临床特征中有显著的差异。根据聚类分析的结果,我们将TCGA数据库中cc RCC样本划分为3个亚组后,发现亚组cluster 2的总体生存时间(overall survival,OS)显著小于其他两个亚组。并且,在cluster 2中,IGF2BP2和IGF2BP3表达水平显著高于其他两个亚组;同时,这两个基因的拷贝数变异(CNV)显著高于其他两个亚组,cluster 2亚组的肿瘤突变负荷(TMB)的结果也与其他两个亚组有显著差异。主成分分析结果也表明,IGF2BP2和IGF2BP3是cluster 2亚组中的关键基因。加权基因共表达网络分析(WGCNA)结果表明,棕色基因模块与cluster 2亚组相关性最高。GO富集分析和GSEA结果表明,棕色模块基因与T细胞功能相关,说明cluster 2及相关模块与肿瘤免疫细胞浸润存在联系。然后,本研究使用单样本富集分析(single sample gene set enrichment analysis,ss GSEA)算法,计算样本免疫细胞浸润分数后,K-M生存分析和单因素Cox回归分析结果表明,T细胞亚型和cc RCC患者的预后有关联。通过比较不同亚组中免疫细胞浸润分数,我们发现cluster 2中T细胞相关亚型(CD4+T细胞、CD8+T细胞、辅助T细胞)浸润分数显著高于其他两个亚组。并且,几种抗原提呈相关基因和免疫检查点基因在亚组中表达水平也有显著的差异。通过Spearman相关性分析方法,我们发现,IGF2BP2和IGF2BP3和T细胞亚型在cluster 2中有显著的相关性。并且,生存分析也表明这两个关键基因与cc RCC患者预后相关。在分析与IGF2BP2相关基因过程中,我们发现HMGA2基因与IGF2BP2具有显著的正相关性。并且,HPA数据库中免疫组化结果表明,IGF2BP2在cc RCC肿瘤细胞细胞质中高表达,HMGA2在cc RCC肿瘤细胞细胞核中高表达,而IGF2BP3在cc RCC中表达水平低。结论:m6A调控因子可能影响cc RCC免疫细胞浸润,其中IGF2PB2和IGF2PB3在调节免疫细胞浸润中起到了重要作用。而HMAGA2可能影响IGF2BP2的表达水平,通过HMGA2-IGF2BP2对cc RCC免疫细胞浸润产生影响。