【摘 要】
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目的:本实验旨在研究LINC00511在非小细胞肺癌中的表达变化以及对其癌症生物学行为的影响和潜在的作用机制,为NSCLC的诊断和治疗提供理论依据。方法:1、通过q RT-PCR技术分析LINC00511在NSCLC细胞系及组织中的表达水平。选取2种表达差异性最为显著的NSCLC细胞系,敲减LINC00511在其中的表达水平。通过CCK-8实验、细胞周期实验、划痕实验以及Transwell实验检测
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目的:本实验旨在研究LINC00511在非小细胞肺癌中的表达变化以及对其癌症生物学行为的影响和潜在的作用机制,为NSCLC的诊断和治疗提供理论依据。方法:1、通过q RT-PCR技术分析LINC00511在NSCLC细胞系及组织中的表达水平。选取2种表达差异性最为显著的NSCLC细胞系,敲减LINC00511在其中的表达水平。通过CCK-8实验、细胞周期实验、划痕实验以及Transwell实验检测敲减LINC00511对NSCLC细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。构建敲减LINC00511后的裸鼠荷瘤模型,研究LINC00511对NSCLC体内生长的影响。通过统计学分析探讨LINC00511表达量高低与67例NSCLC手术患者的临床病理资料间的相关性。2、经过star Base数据库分析发现mi R-625-5p是LINC00511的潜在靶点之一,并设计双荧光素酶报告基因实验验证LINC00511和mi R-625-5p间的连接关系。通过q RT-PCR技术分析mi R-625-5p在NSCLC细胞系及组织中的表达水平。选取表达差异性最为显著的NSCLC细胞系,分别用LIN-NC、LINC00511以及LINC00511+mi R-625-5p mimic进行转染后,通过CCK-8实验、细胞周期实验、划痕实验、Transwell实验检测过表达LINC00511、同时过表达LINC00511和mi R-625-5p后对NSCLC细胞的增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。3、通过阅读文献以及使用数据库分析发现GSPT1是mi R-625-5p的下游靶点,并设计双荧光素酶报告基因实验证明两者间的关系。通过q RT-PCR技术分析GSPT1在NSCLC细胞系及组织中的表达水平。通过免疫组化染色法检测GSPT1在敲减LINC00511的裸鼠荷瘤模型中的表达。通过蛋白质印迹法检测GSPT1在敲减LINC00511的NSCLC细胞系中的表达。选取表达差异性最为显著的NSCLC细胞系,分别用LIN-NC、LINC00511以及LINC00511+sh GSPT1转染NSCLC细胞后,通过CCK-8实验、细胞周期实验、划痕实验、Transwell实验检测过表达LINC00511、同时过表达LINC00511和敲减GSPT1后对NSCLC细胞的增殖、细胞周期、迁移和侵袭的影响。结果:1、LINC00511在NSCLC细胞和组织中表达水平升高。敲减LINC00511抑制NSCLC细胞的增殖、细胞周期、迁移和侵袭,并且抑制了NSCLC细胞在体内生长。LINC00511高表达与临床指标中的肿瘤直径较大、淋巴结转移阳性、TMN分期较晚以及5年生存率偏低具有相关性。2、NSCLC细胞和组织中mi R-625-5p的表达水平下降,且NSCLC组织中LINC00511表达水平与mi R-625-5p表达水平呈负相关。mi R-625-5p是LINC00511的下游结合位点。mi R-625-5p可以抑制LINC00511过表达引起的NSCLC细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭增强作用。3、GSPT1在NSCLC细胞和组织中表达水平升高,且NSCLC组织中GSPT1表达水平与LINC00511表达水平呈正相关,与mi R-625-5p表达水平呈负相关。GSPT1在敲减LINC00511的NSCLC细胞和裸鼠荷瘤模型中的表达水平均降低。敲减GSPT1可以抑制LINC00511过表达引起的NSCLC细胞增殖、细胞周期、迁移和侵袭增强作用。结论:LINC00511通过靶向mi R-625-5p/GSPT1促进NSCLC细胞的增殖、细胞周期、迁移和侵袭。LINC00511有望成为NSCLC的新型标志物和治疗靶点。
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