鲜虫草中核苷类成分提取纯化及其神经保护作用研究

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帕金森(PD)是仅次于阿尔茨海默病的一种神经退行性疾病,主要是中脑黑质致密部多巴胺能神经元缺失导致神经递质无法正常分泌造成,主要表现为行为震颤、运动障碍、行动迟缓等;另外,纹状体内胶质细胞激活是PD发病初期的表现之一,故行为学测试、星形胶质细胞和小胶质细胞数目检测也是判断帕金森病主要手段。目前治疗PD的临床药物盐酸多巴胺只能延缓PD发病速度,并不能阻止多巴胺能神经元进行性丢失。因此,PD药物治疗与神经保护作用辅助疗法,也不失为一种较好的选择。食品中核苷类成分,比如肌酐、鸟苷、腺苷等具有一定程度神经保护作用。新资源食品蛹虫草中也含有丰富的核苷类成分,这些核苷类成分是否借助其神经保护作用而对PD具有一定辅助疗效值得深入研究。为此,本研究首先比较四种产地、三种采后加工方法的蛹虫草中核苷类物质及其它活性成分种类及含量,选择质量较优的虫草进行核苷类成分提取纯化;并通过其对PD小鼠运动能力、氧化应激、神经递质等改善情况进行比较,逐步剖析核苷类单一成分(虫草素、腺苷、HEA)、核苷类代表性组合物(虫草素+腺苷+HEA)、虫草核苷提取纯化物对PD神经保护作用大小及其相互联系,这为虫草在神经退行性疾病方面的辅助功用挖掘提供科学依据。具体研究结果如下:1)比较了云南、山东、安徽、湖北四个地方蛹虫草中核苷类物质等活性成分含量大小以及种类差异,并以此判断较好蛹虫草来源产地和加工方法。通过比较,四个产地蛹虫草在核苷类物质种类上并无明显差异。与其他产地相比,云南产地蛹虫草在活性成分含量上更有优势,其中麦角甾醇、虫草酸含量、SOD酶活均高于其他产地,腺苷、虫草素、N6-(2-羟乙基)-腺苷含量分别为0.19 mg/g、0.21mg/g、0.24 mg/g。不同加工方式活性成分含量顺序依次为新鲜>冻干>烘干。2)比较了HPD100、NKA-Ⅱ、D151三种大孔吸附树脂优劣,最终选用NKA-Ⅱ大孔吸附树脂作为纯化树脂。通过对NKA-Ⅱ大孔吸附树脂各种吸附工艺优化,得出最佳纯化工艺为:样品液p H为8.0,洗脱液p H为7.0,洗脱剂乙醇浓度为60%,上样量体积为50 m L,洗脱剂流速为3 BV/h,洗脱剂用量为175 m L,纯化次数为2-3次。纯化后样品经液质分析得主要核苷类物质有胞苷、鸟苷、腺苷、虫草素、HEA,经3次纯化后纯度均有所提高。经过三次纯化后,新鲜虫草核苷纯化物中腺苷、虫草素、HEA纯度分别为:4.7%、14.8%、10.8%,冻干为:9.8%、12.7%、9.4%,烘干为:6.3%、17.3%、5.2%。3)研究了新鲜、烘干蛹虫草纯化物和腺苷、虫草素、HEA单一及混合物对帕金森小鼠行为学、神经递质、胶质细胞形态和数目大小等影响。发现鲜(干)蛹虫草核苷类纯化物、三种核苷单一组分及混合物等均对PD小鼠具有改善或缓解作用,其中均以新鲜低剂量优于烘干低剂量,虫草素中剂量优于腺苷、HEA中剂量,尤其在神经递质含量和胶质细胞数量方面,这种差异极其显著。
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