许氏平鮋C型凝集素SsCTL4和补体组分SsC1qDC基因的克隆、表达及功能研究

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许氏平鮋(Sebastes schlegelii)是一种重要的经济海水养殖鱼类,主要养殖区域包括中国,韩国和日本。近年来,随着养殖规模的不断扩大,许氏平鮋的病害也日益严重。但是,许氏平鮋应对病原感染的免疫机制研究却非常有限,这严重阻碍了其病害防治的研究进程。基于此,本论文深入研究了许氏平鮋C型凝集素SsCTL4基因和补体组份SsC1qDC基因的结构、表达特征及生物学功能。
  C型凝集素(CTL)作为一种免疫受体,在免疫反应和免疫逃逸中受到广泛关注。SsCTL4全长cDNA包括一个765bp的开放阅读框,一个87bp的5’端非翻译区(UTR)和一个1111bp的3’端非翻译区。与其他几种鱼类氨基酸序列的同源比对为78%-84%。通过分析几种保守C型凝集素的特征,发现其中包含一个糖识别结构域和四个形成二硫键的半胱氨酸残基。SsCTL4在多个组织中均有表达并且在细菌和病毒感染期间表达水平上调。重组SsCTL4(rSsCTL4)对细菌(迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌)和病毒(虹彩病毒ISKNV)具有明显的结合活性。rSsCTL4能以依赖钙离子的方式凝集革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌,在缺乏钙离子或者存在甘露糖的情况下,rSsCTL4的凝集活性消失。rSsCTL4能提高巨噬细胞的杀菌活性。rSsCTL4可增强鱼体对细菌的抵抗能力,但同时可使鱼体对病毒的易感性增加。
  含有C1q结构域的(C1qDC)蛋白是脊椎动物和无脊椎动物先天免疫中重要的模式识别受体,参与一系列免疫反应。SsC1qDC基因全长cDNA序列包括一个636bp的开放阅读框,一个45bp的5’端非翻译区和一个106bp3’端非翻译区。与其他几种鱼类氨基酸序列的同源比对为62%-69%。SsC1qDC具有C1qDC的保守特征,包括信号序列和C1q域。SsC1qDC在多个组织中均有表达并且在细菌和病毒感染期间表达水平上调。重组SsC1qDC(rC1qDC)对PAMPs(LPS和PGN)具有明显的结合活性并且可与人热聚集的IgG相互作用。rSsC1qDC能提高巨噬细胞对鳗弧菌的吞噬活性,在rSsC1qDC的存在下,能提高对细菌感染的抗性。
  这些研究结果表明SsCTL4和SsC1qDC均是许氏平鮋应对病原感染过程的重要的模式识别受体,在许氏平鮋天然免疫防御系统中起着至关重要的作用。上述研究结果将为许氏平鮋病害防治奠定理论基础并提供新的途径。
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