白纹伊蚊是我国常见的蚊种之一,极具侵袭力,能够传播如登革热、黄热病、寨卡病毒病和基孔肯亚热等多种病毒性传染病。将人类感染这些传染病的风险降到最低,有效防控其传播媒介白纹伊蚊是关键。近年来,我国登革热连年多省市暴发,且发生范围不断扩大,使得防控需求日益加大。目前,登革热疫情暴发后蚊虫的控制很大程度上依赖于化学杀虫剂的使用。由于拟除虫菊酯类杀虫剂具有高效杀虫活性,且对哺乳动物的毒性较低等优势,这类杀虫剂使用最为普遍。然而,持续、大量地使用杀虫剂杀灭白纹伊蚊,就相当于给予种群一种选择压力。为了抵抗这种选择压力,白纹伊蚊体内杀虫剂的靶标基因某些特定位点会发生突变,导致其对杀虫剂的抗药性得到发生和发展。抗药性,是蚊虫防控的巨大障碍。因此,监测野外白纹伊蚊种群抗药性靶标基因的突变情况,阐明蚊虫抗药性的产生机制对于抗药性治理、指导杀虫剂的科学合理使用至关重要。本研究,在全国范围内采集39个地理种群的白纹伊蚊。针对现场采集的蚊虫样本,首先用分子生物学方法研究了与拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性密切相关的VGSC基因V1016、11532与F1534位点的突变与种群遗传学参数;第二,针对F1534位点建立了更加高效、经济的突变检测方法。现将研究结果总结如下:1.在北京市、重庆市、江苏省、湖南省和云南省,采集了 12个白纹伊蚊野外种群,共407份样本,检测其VGSC基因V1016、11532和F1534位点基因型、等位基因型及频率,从而揭示其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平。测序结果表明,V1016位点存在3种基因型,即野生型纯合子V/V(277/68.06%),野生/突变型杂合子V/G(102/25.06%)以及突变型纯合子G/G(28/6.88%);在11532位点也发现3种基因型,分别是野生型纯合子I/I(281/69.04%),野生/突变型杂合子 I/T(98/24.08%)和突变型纯合子 T/T(28/6.88%);F1534 位点与 V1016 和11532位点相比,突变类型更加丰富多样。该位点一共检测到6种基因型,包括1种野生型纯合子F/F(199/48.89%),2种野生/突变型杂合子F/S(66/16.22%)和 F/C(20/4.91%),2 种突变型纯合子 S/S(49/12.04%)和 C/C(37/9.09%),还有一种突变型杂合子S/C(36/8.85%)。VGSC基因突变的检测结果提示以上各种群均已对拟除虫菊酯类杀虫剂产生了抗药性。以上12个种群的种群遗传学研究结果表明,除了永州市种群外,其他可测种群均符合哈迪-温伯格平衡。V1016、I1532和F1534位点之间不存在连锁不平衡现象。在V1016位点,北京市昌平区、通州区、大兴区,重庆市南川区、黔江区,永州市、张家界市和大理市种群,存在近交现象;北京市丰台区、重庆市潼南区和沙坪坝区及南京市种群存在远交现象。在I1532位点,北京市大兴区和丰台区、大理市种群存在近交现象,北京市昌平区和通州区、南京市种群有远交现象。而在F1534位点,除了重庆市潼南区和南京市种群存在远交现象之外,其他地区均存在近交现象。永州市和张家界市种群与北京市四个种群之间的分化较为显著;大理市与除北京之外的其他各个种群之间分化显著。Nm值的计算结果表明,各个种群间存在频繁的基因交流。2.对浙江省杭州市、宁波市等地区内已有VGSC基因I1532和F1534突变数据资料的27个白纹伊蚊种群,共计817份样本,检测其VGSC基因V1016位点基因型、等位基因型及频率,从而揭示其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平。总的来看,V1016位点存在3种基因型,即野生型纯合子V/V(577/70.62%),野生/突变型杂合子V/G(181/22.15%)以及突变型纯合子G/G(59/7.22%)。除了宁波市和海口市秀英区的两个种群(HKXX和HKYX)之外,其他24个种群均检测到了 V1016位点的突变。泉州市区的突变率最高。3.利用白纹伊蚊VGSC基因F1534位点的8种基因型共计165份核酸样本,以测序法为金标准,建立高效、经济的AS-PCR检测技术。结果表明,无论是基因型还是等位基因型频率,AS-PCR的检测结果与测序基本吻合。除L/L(TTG/L)基因型外,对F/F、F/S、F/C、F/L(CTC/L)、S/S、C/C和S/C基因型的检测准确率分别为 100%、95.35%、100%、100%、100%、100%和 100%。