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背景与目的 肝细胞性肝癌(HCC)是世界范围的第5大恶性肿瘤，其死亡率占据到所有的恶性肿瘤的第3位，在世界范围内，每年肝癌的发病人数约为50万，约占人类癌症的6％。HCC的发生呈现出明显的性别趋势，男性与女性的肝癌的发病率的比例大概在2.4∶1。HCC恶性程度高，发展迅速，治疗困难，病死率高，始终是我国医学界面临的基础和临床研究重大课题。微小RNA(microRNAs或者miRNAs)是指长度约为21-23nt的某些特殊的微小型的RNA组成的RNA家族，它能够与其特定的目标mRNA的3UTR段相结合，并且在转录后水平通过促进其目标mRNA的降解或/和抑制其转录或者转录后的翻译过程而发挥负向调控基因表达的作用。本文旨在发现肝癌组织中明显差异性表达的miRNA，研究其在肝癌发病机制中的作用。 材料与方法 1.通过RT-qPCR检测技术检测肝癌细胞系与正常肝脏细胞系中差异性表达的miRNA。 2.通过生物信息学的方法，查找上述差异性表达的miRNA的潜在靶基因，并对靶基因的功能进行统计分类，以了解差异性表达的miRNA的功能。并且收集6例临床肝癌标本，运用RT-qPCR方法进一步验证肝癌组织中差异性表达的miRNA。 3.利用慢病毒转染的方法制作稳定性表达上述差异性表达miRNA的细胞，分别运用MTT、流式细胞术以及细胞划痕实验来研究该miRNA对肝癌细胞的增殖以及迁移能力的作用。 结果 1.确定出肝癌细胞系中9种差异性表达的miRNA，分别为Let-7a，miR-10a，miR-107,miR-124a, miR-132, miR-133a,miR-154, miR-302c。 2.9种稳定性差异表达miRNA有6种miRNA能够在miRanda，PicTar， TargetScans三种软件找到共同的靶基因，它们的靶基因主要参与了19项生物学过程，这其中有60％以上的生物学事件都与肿瘤的发病以及发展机制有关，这些机制包含了调节核酸代谢、调节细胞周期、细胞骨架的形成、细胞的增殖以及Wnt和Norch信号通路等。对每个miRNA的靶基因的功能分别进行的分析发现，Let-7a、miR-107、miR-132的靶基因功能主要集中在调节转录过程等方面，miR-10a的靶基因功能则重要集中在调节转录过程、细胞骨架的形成以及细胞的增殖方面。而miR-124a和miR-133a的潜在靶基因的功能则主要集中在对细胞增殖的调节方面。在6例肝癌组织样本验证差异性表达的microRNA中miR-133a下调表达最明显。 3.选取稳定性下调表达最明显的miR-133a为研究对象，发现miR-133a能够通过将肝癌细胞阻滞在S期来抑制肝癌细胞的增殖，并且能够影响肝癌细胞的迁移能力。 结论 本研究发现肝癌细胞系中差异性表达的microRNA的表达谱，并对差异性表达的microRNA的靶基因进行预测，这些靶基因中的大部分与肿瘤的发生存在着一定的联系。研究还发现miR-133a无论在肝癌细胞系中还是在肝癌组织中均明显下调表达。进一步的功能学研究发现miR-133a能够通过将肝癌细胞阻滞在S期来抑制肝癌细胞的增殖，并且能够影响肝癌细胞的迁移能力。