枸杞多糖GPC检测、提取工艺优化及其稳定性研究

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枸杞始载于《神农本草经》,种植和药用历史悠久,迄今已有2000年以上的应用历史,已形成了其道地产区和药用主流品种。《中华人民共和国药典》(一部,2010年版)收载枸杞为茄科植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。枸杞是我国传统的药食兼用的名贵中药材,有滋补肝肾、益精明目等功能,而枸杞中含有的枸杞多糖是枸杞的主要活性成分之一。枸杞原料多种多样,质量也参差不齐,并且枸杞多糖含量测定时使用的化学方法一般都会用到有毒有害的试剂,且测定的含量差别较大,不能较好的反映多糖的真实含量及特性;使用公司现有枸杞多糖提取工艺提取枸杞多糖存在提取率及含量不稳定等问题,并且未做好相关枸杞原料的多糖的保存稳定性研究。为了解决这些问题,创建了能够较好的反映枸杞多糖真实含量及特性、相对省时、准确度高的凝胶渗透色谱(GPC)检测方法,同时对其提取工艺进行了优化,获得了最佳工艺条件,提取了5个不同品种的枸杞多糖,筛选了枸杞原料,并对枸杞原料的多糖的保存稳定性进行了研究。1、创建了枸杞多糖GPC检测方法,其最佳条件为:流动相为0.02 mol/L KH2PO4,流速0.6 mL/min,柱温35℃,G 5000串联G 3000检测;多糖检测限为0.50μg,定量限为1.67μg;通过方法学验证,GPC检测方法重现性良好。采用创建的GPC方法测定分析了5种不同产地枸杞中的多糖含量及分子量分布,多糖含量在12.35 mg/g~18.84mg/g之间,都低于用苯酚—硫酸法测定的多糖含量;不同产地枸杞多糖峰尖分子量基本一致,主要共四个峰尖,最高分子量为920661.5 Da,最小分子量为2978.5 Da,但是不同品种的枸杞多糖各分子段的含量存在一定差异。2、本文提取枸杞多糖的方法为热水浸提,采用苯酚—硫酸法对其多糖的含量进行了测定,并通过单因素实验以及正交试验确定了热水浸提的最佳工艺条件。其最佳的工艺条件为:浸提温度100℃、浸提时间5 h、浸提次数4次、浸提料液比为1:40,多糖含量可达5.53%。3、按照正交试验获得的最佳提取工艺条件,对5个不同品种的枸杞:宁夏夏果、宁夏秋果、内蒙古夏果、内蒙古秋果、青海夏果进行提取多糖,测得的多糖含量分别为:5.38%、5.51%、4.78%、4.24%、3.40%。4、常温下枸杞中的多糖含量随着放置时间的延长,整体呈下降趋势,放置3个月,多糖含量下降比较缓慢,放置6个月后多糖含量下降非常明显,含量下降到约为原来含量的一半。因而枸杞中的多糖在常温下放置3个月相对较稳定,之后稳定性逐渐下降。枸杞中的多糖加速实验到第3个月时,多糖含量未出现明显的下降,表明枸杞中的多糖在40℃条件下保存3个月稳定性良好。枸杞中的多糖在常温和40℃条件下保存3个月相对稳定。
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