丝状噬菌体应用于黑色素瘤治疗和预防白色念珠菌感染的研究

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丝状噬菌体是一种对人类安全的细丝状纳米结构的细菌病毒(约900nm长,6-7nm宽)。噬菌体展示技术是指在噬菌体的基因组中插入一段外源序列,并使之以融合蛋白的形式表达在噬菌体外壳蛋白上。展示有不同外源序列的噬菌体可以组成噬菌体展示文库,利用噬菌体展示文库对目标分子进行特异亲和筛选,可以得到具有特异亲和力的多肽或者蛋白。利用噬菌体文库筛选出的序列可以与靶分子特异结合,因此噬菌体可以被用于很多领域,例如:靶向位点筛选,作为抗原载体,生物传感,生物成像,分子间相互作用力等。在靶向位点筛选领域,如果将噬菌体文库筛选出的肿瘤特异结合序列与肿瘤治疗药物结合形成复合物,可以靶向结合并杀死肿瘤细胞。利用噬菌体文库筛选技术,本实验筛选出了黑色素瘤细胞的特异结合多肽,然后将多肽与金纳米棒偶联形成复合体,利用金纳米棒在特定光照下会产生局部高热的特性,对黑色素瘤细胞进行靶向高热治疗。结果发现,噬菌体筛选出的黑色素瘤特异结合序列与金纳米棒偶联形成的复合物,与黑色素瘤细胞共孵育后,经过808nm激光照射,可以在体外靶向杀死黑色素瘤细胞。如果将这一多肽偶联的金纳米棒复合物应用于黑色素瘤荷瘤小鼠,也可以实现在裸鼠体内靶向消减黑色素肿瘤这一效果。噬菌体因其具有较好的免疫原性的特性,是一种良好的疫苗载体。本实验利用噬菌体这一特性,将噬菌体进行改造,在其外壳蛋白上展示一段白色念珠菌毒性蛋白--Sap2蛋白的抗原表位多肽片段(缬氨酸-赖氨酸-酪氨酸-苏氨酸-丝氨酸,VKYTS(EPS)),形成一种杂合噬菌体(EPSP),期望利用改造的噬菌体作为疫苗来预防白色念珠菌的感染。白色念珠菌感染是临床上一个很棘手的难题,在器官移植等需要降低免疫力或者肿瘤患者等一些免疫力低下的病人中体内,白色念珠菌可能会由原来的正常菌群转变为致病菌,一旦在病人体内感染,将会对病人的治疗造成极大困难。本实验中,杂合噬菌体与重组型Sap2蛋白(r Sap2)分别被用来免疫小鼠,然后对免疫小鼠的体液和细胞免疫应答分别进行评估。结果发现,杂合噬菌体和r Sap2一样,可以明显诱导小鼠产生强烈的免疫应答,并且产生能够与r Sap2蛋白和CA相结合的抗体来抑制白色念珠菌的感染。同时,免疫了杂合噬菌体的小鼠在对抗白色念珠菌感染中存活率显著提高。噬菌体作为一种纳米级病毒纤维,不仅是良好的抗原载体,其依靠侵染细菌就可以大量生产的特性,使之也具有良好的成本效益。所有这些结果表明,展示有EPS的杂合噬菌体可以作为对抗真菌感染的有效疫苗候选。综上结果表明,噬菌体不但是一种良好的生物筛选的工具,利用其可以筛选出黑色素瘤特异结合多肽,继而对黑色素瘤进行靶向治疗;也可以作为载体成为白色念珠菌感染的疫苗候选。
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