论文部分内容阅读
目的：构建大鼠尾静脉注射模型，研究瘦素（leptin）在正常大鼠体内对载脂蛋白M（apoM）表达及分泌的影响。方法：健康成年SD雄性大鼠，采取尾静脉注射方式分别泵入生理盐水和50ng/mlleptin，泵速设为2.5ml/h，持续6hrs。分别检测大鼠血糖、胰岛素、总胆固醇（TC）、总甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。RT-PCR方法检测大鼠肝脏apoM、apoB、LDL-R及apoAI表达的变化，dot-blotting方法血清ApoM的变化。结果：尾静脉置管连续输入50ng/ml leptin6hrs后，SD大鼠肝脏apoM mRNA水平下降55.15%（P=0.0159），apoB和LDL mRNA水平分别下降48.60%（P=0.0079）及40.43%（P=0.0159），apoAI表达增加149%（P=0.0079），而血清apoM水平则无明显统计学差异。尾静脉模型中，50ng/ml leptin对处理组大鼠血清胰岛素水平较对照组下降68.82%（P=0.0317），而血糖增加14.68%（P=0.0079），其他脂蛋白无明显变化。结论：leptin对apoM的表达调节可能首先发生在肝脏，肝脏是leptin调节apoM表达的关键部位。leptin在体内对apoM的表达调节可能与低胰岛素水平和高血糖水平相关。目的：利用大鼠离体肝灌注模型及人正常细胞株LO2细胞，进一步研究leptin在肝脏中对apoM及相关脂质的表达调节作用。方法：健康成年SD雄性大鼠肝脏游离后，将肝脏置于灌注装置中。（1）leptin对离体肝脏apoM表达的影响：持续以5ml/min分别泵入培养液（含牛血清白蛋白30g/L）、含10ng/ml leptin培养液（含牛血清白蛋白30g/L）、含100ng/ml leptin培养液（含牛血清白蛋白30g/L），分别设立对照组，每组8个离体肝灌注模型。持续6hrs后取肝组织标本检测相关指标的mRNA水平。（2）人正常细胞株LO2细胞经不同浓度leptin（10ng/ml、100ng/ml、500ng/ml）分别孵育24hrs后，检测apoM mRNA的表达水平。结果：在离体肝灌注模型中，生理浓度leptin（10ng/ml）对apoM、apoB、LDLR表达无明显影响（P>0.05），超浓度leptin处理组（100ng/ml）能显著上调apoM、apoB、LDLR的表达（P值分别为0.029，0.047，0.008），生理浓度leptin（10ng/ml）和超浓度leptin处理组（100ng/ml）对肝脏apoAI的表达无明显影响（P>0.05）。500ng/ml leptin均能显著下调人正常细胞株LO2细胞apoM mRNA的表达。结论：Leptin对肝实质细胞apoM mRNA表达具有调节作用。离体肝灌注系统缺乏体内的整体调节机制，与正常体内环境相比，leptin与胰岛素之间的反馈调节信号受阻，这可能是leptin在肝灌注系统中对apoM的调节作用不同于体内调节的一个原因。目的：研究大鼠离体肝灌注模型及人正常细胞株LO2细胞中，leptin调控apoM表达的可能机制。方法：离体肝脏灌注组分为4组（8只/组），分别为①培养液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin；②培养液（含牛血清白蛋白30g/L）+0ng/ml leptin+10μMLY294002；③培养液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin；④培养液（含牛血清白蛋白30g/L）+100ng/ml leptin+10μM LY294002。持续以5ml/min泵入上述灌注液，持续6hrs。6hrs后取肝组织标本检测相关指标的mRNA水平。人正常细胞株LO2细胞分别经①RPMI1640培养液+500ng/ml leptin；②RPMI1640培养液+500ng/ml leptin+1μM LY294002；③RPMI1640培养液+500ng/mlleptin+5μM LY294002；④RPMI1640培养液+500ng/ml leptin+10μM LY294002孵育24hrs后，检测apoM mRNA表达水平的变化。结果：LO2细胞经500ng/ml leptin及不同浓度的PI3K阻断剂LY294002共孵育24hrs后，对apoM的表达水平无明显改变（P>0.05）。含10μM PI3K阻断剂LY294002的RPMI1640培养液组灌注6hrs后，与对照组相比apoM表达水平明显上升；超生理浓度的leptin（100ng/ml）与10μM LY294002（0μM LY294002）共灌注6hrs后，与单独使用生理浓度的leptin（100ng/ml）灌注组相比，apoM表达水平无统计学差异。通过双因素相关性分析，leptin与LY294002两种处理因素不存在交互作用。结论：Leptin在体外对apoM的表达调控可能不是通过PI3K途径实现的。