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罗非鱼是我国淡水养殖的重要品种,主要在广东、海南、广西、云南及福建等省份养殖。近年来由于规模化养殖模式的推广和养殖环境恶化,导致病害频发,其中以无乳链球菌病的危害最大。目前尚无报道罗非鱼感染无乳链球菌的途径及侵染靶器官。开展罗非鱼感染无乳链球菌后的动态病理学及免疫酶活性变化研究工作,可以为更深入研究无乳链球菌的致病机理和防控药物研发提供理论依据。本研究采用注射、灌胃、浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)感染,观察三种方式感染后病原菌在吉富罗非鱼体内的分布规律及病理变化,同时研究不同种群罗非鱼感染无乳链球菌后血液及肝脏组织中免疫相关酶的变化规律。主要结论如下:(1)采用注射、灌胃、浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行人工感染,其中注射和灌胃均出现典型的无乳链球菌病临床症状,注射组的死亡周期最短,感染后12 h出现死鱼,感染后24 h出现死亡高峰,死亡率最高,达到92.5%;灌胃组感染后5 h出现死鱼,感染后48 h出现死亡高峰,死亡率为90%;而浸泡组感染后仅出现轻微发病症状,没有出现死鱼。(2)在吉富罗非鱼感染无乳链球菌后体内病原菌分离方面,注射组和灌胃组感染后2h在脾脏、肝脏、前肾、胃、腮、皮肤和肌肉组织中均可分离出病原菌,感染后5h在两组的脑组织中均可分离出病原菌,感染后8h两组均已表现出明显的发病症状,此时体内各组织的病原菌浓度达到峰值;而浸泡组感染后8 h才在体内各组织中分离出病原菌,但它们的浓度均低于相同时期的注射组和灌胃组。(3)对吉富罗非鱼进行注射、灌胃、浸泡三种方式感染无乳链球菌,取感染后2 h、5 h、8 h、12 h、24 h的鳃、肠、脾脏、肝脏组织进行苏木精-伊红染色法(H.E染色法)染色及免疫组织化学定位。H.E染色结果显示:三种方式在感染后早期(2-5 h)鳃、肝脏、脾脏、肠组织均已经出现明显病变,其中鳃表现为基部上皮细胞增生及鳃小片坏死,脾脏为含铁血黄素增多、巨噬细胞弥漫性浸润以及血管变细,肝脏为出现空泡变性、毛细血管破裂,肠为肠绒毛断裂、黏膜下层细胞结构被破坏;三种方式的病变程度依次为注射组>灌胃组>浸泡组。免疫组化定位结果显示:灌胃感染后病原菌强阳性信号先在肠组织出现,注射组为脾脏组织,浸泡组为鳃组织。(4)采用腹腔注射方式对吉富罗非鱼抗病选育系、百桂品系吉富罗非鱼及奥尼罗非鱼感染无乳链球菌(HN016菌株),分析感染后三种罗非鱼血液及肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、总抗氧化能力(T-AOC)等免疫相关酶活性变化。结果显示:三个不同种群罗非鱼肝脏组织ACP、AKP、LZM、SOD、T-AOC酶活力均呈现先升高再降低的趋势,而CAT酶活力呈现先下降再升高的趋势;而感染24h后CAT、ACP、AKP、LZM活力在三种罗非鱼血液中均表现出上升的趋势。