论文部分内容阅读
目的:类高内皮微静脉是病理过程中演变而来的一种类似正常淋巴组织内高内皮微静脉样的血管,有与高内皮微静脉相似的形态和功能。本研究通过对正常高内皮微静脉、皮肤肿瘤周围组织内类高内皮微静脉和局域淋巴结高内皮微静脉的形态特征和细胞因子表达的比较研究,旨在初步探讨类高内皮微静脉的发生、形态特征以及相关细胞因子和蛋白多糖的表达,为阐明类高内皮微静脉的演变、结构与功能特征及对肿瘤免疫治疗的研究提供资料与依据。
方法:1、采用透射电镜、免疫组织化学、阳性胶体铁染色方法,观察小鼠正常腋淋巴结高内皮微静脉和淋巴细胞穿越其管壁的形态学表现,分析LFA-1、ICAM-1、PECAM-1、蛋白多糖的表达。2、采用透射电镜、免疫组织化学、原位杂交、RT-PCR、阳性胶体铁染色方法,观察小鼠皮肽移植瘤周围组织内类高内皮微静脉的超微结构,分析LFA-1、ICAM-1、E-选择素、CCR7、TNF-α、INF-γ、蛋白多糖的表达;3、采用透射电镜、原位杂交、RT-PCR方法、观察移植瘤局域腋淋巴结高内皮微静脉的超微结构,分析ICAM-1mRNA、E-选择素mRNA、PECAM-1mRNA、TNF-αmRNA、INF-γmRNA表达。
结果:1、高内皮微静脉中,位于内皮细胞外、细胞内、细胞间有大量淋巴细胞存在,淋巴细胞以突起或焊点样细胞膜突起与内皮细胞接触,在基底膜内、外板之间的透明层也可见淋巴细胞存在;LFA-1表达于高内皮微静脉管腔内与内皮细胞接触的淋巴细胞上;ICAM-1和蛋白多糖表达于内皮细胞的管腔侧细胞膜和与之接触的淋巴细胞上;PECAM-1表达于内皮细胞和穿越其中的淋巴细胞上。2、在皮肤移植瘤周围组织内存在内皮细胞高大、细胞器丰富的类高内皮微静脉,有淋巴细胞与其粘附或穿越,其超微结构随病程进展而变化;类高内皮微静脉表达ICAM-1、E-选择素、蛋白多糖,且与病程进展相关,有LFA-1+、CCR7+细胞与之牢固粘附。3、移植瘤局域淋巴结高内皮微静脉的超微结构、ICAM-1mRNA、E-选择素mRNA、PECAM-1mRNA的表达随病程进展而变化。4、在皮肤移植瘤周围组织内,大量TNF-α+、INF-γ+细胞聚集在移植瘤周围区,少量阳性细胞浸润到移植瘤区;在局域淋巴结内大量TNF-α+、INF-γ+细胞位于副皮质区,少量阳性细胞位于淋巴小结内。TNF-αmRNA、INF-γmRNA的表达随病程进展而变化。5、在移植瘤周围皮肤和局域淋巴结内,TNF-α、INF-γ表达的高峰位于ICAM-1、E-选择素、PECAM-1表达的高峰之前。
结论:1、淋巴细胞穿越高内皮微静脉迁移过程与体外细胞培养研究结果基本一致,可分为滚动、牢固粘附、穿越内皮细胞内或间隙和穿越基底膜四步。2、LFA-1、ICAM-1、蛋白多糖参与了淋巴细胞与内皮细胞之间的牢固粘附,PECAM-1可能与淋巴细胞跨内皮迁移过程有关。3、皮肤移植瘤周围组织中部分毛细血管后微静脉可演变为类高内皮微静脉,是淋巴细胞向肿瘤组织浸润(淋巴细胞归巢)的重要场所,其演变过程与病程进展有关。4、类高内皮微静脉表达E-选择素、ICAM-1、蛋白多糖、CCR7的配体SLC,与淋巴细胞向病变区域募集,进行抗肿瘤免疫反应有关。5、E-选择素、ICAM-1、蛋白多糖表达的类高内皮微静脉的数量变化与肿瘤病程进展相关。6、TNF-α、INF-γ可以上调移植瘤周围皮肤、局域淋巴结内ICAM-1、E-选择素、PECAM-1的表达。