【摘 要】
：
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）,又称为呕吐毒素,是一种由真菌产生的次级代谢产物,广泛存在于小麦、大麦、燕麦和玉米等谷物中。DON具有细胞毒性、免疫毒性和神经毒性,能够引起动物呕吐,近十年来,有关DON对人类产生不良影响的报道越来越多。本研究基于合成的免疫原制备抗DON单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）,分别建立了一种单T线和双T（T1、T2）线
论文部分内容阅读
脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynivalenol,DON）,又称为呕吐毒素,是一种由真菌产生的次级代谢产物,广泛存在于小麦、大麦、燕麦和玉米等谷物中。DON具有细胞毒性、免疫毒性和神经毒性,能够引起动物呕吐,近十年来,有关DON对人类产生不良影响的报道越来越多。本研究基于合成的免疫原制备抗DON单克隆抗体（Monoclonal antibody,mAb）,分别建立了一种单T线和双T（T1、T2）线量子点微球（Quantum dot nanobeads,QBs）免疫层析试纸条（Lateral flow immunoassay,LFIA）,用于玉米和大豆中DON的定量检测。主要研究方法和结论如下:（1）采用N,N’-羰基二咪唑法设计半抗原,合成了DON完全抗原,以DON-BSA/KLH为免疫原免疫小鼠,通过间接竞争酶联免疫吸附法监测小鼠血清的效价。监测得到3只阳性较高、抑制率较好的小鼠。选择2号小鼠进行冲击免疫,经过细胞融合、筛选和亚克隆,但结果仅有9个OD450值高于1.0的细胞培养孔,其中5C4的OD450值为1.81,4H4的OD450值为1.36,抑制率（200 ng/m L）分别为54%以及62%。挑选OD450值较高、细胞生长状态较好的培养孔内细胞通过有限稀释法进行亚克隆,在细胞克隆后充分扩增,用间接竞争ELISA（Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,IC-ELISA）重新监测克隆的培养上清液,没有阳性。（2）基于抗DON单克隆抗体建立了一种竞争型LFIA,并对抗体偶联环境的p H、EDC的用量、抗体用量、DON-BSA浓度以及探针用量进行了优化。在最优条件下,QBs-LFIA检测玉米和大豆中DON的半数抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为340μg/kg和351μg/kg。加标回收实验表明所建立的QBs-LFIA具有较好的回收率和较低的变异系数（Coefficient of variation,CV）,在玉米样本中批内实验回收率为98.56%-104.75%,CV值低于8.41%,而批间实验回收率为105.16%-109.32%,CV低于7.57%;在大豆样本中批内实验回收率为95.50%-103.53%,CV低于7.42%,而批间实验回收率为101.18%-106.01%,CV低于7.95%。本章建立的QBs-LFIA具有较好的产业化应用前景。（3）针对传统单T线模式和双T（T1、T2）线模式对LFIA分析性能的影响进行比较。在试纸条固相载体上,因免疫探针仅在单T线上与全抗原发生特异性识别,导致抗原抗体特异性识别的空间位阻较大,不但延长了试纸条的免疫稳定时间,也降低了试纸条的正确度和精密度。本研究在不改变试纸条尺寸的情况下,通过增加一条T线来改变试纸条的结构,探究双T线模式对免疫稳定时间、正确度和精密度等分析性能的影响。在全抗原用量一定的情况下,按照不同的分配比例(CT1:CT2=4:6、CT1:CT2=5:5和CT1:CT2=6:4)分别建立双T线QBs-LFIA。结果表明双T线的分配比例为CT1:CT2=6:4时,所建立的双T线QBs-LFIA的稳定性更好。在此条件下与传统单T线QBs-LFIA的分析性能进行比较,发现双T线模式的免疫反应时间更快,可提前2 min达到稳定状态,为大批量样本的现场检测节约了时间成本;在加速保存实验中,双T模式稳定性更高（下降幅度在6%以内）,为产品货架期的稳定提供了科学依据。然而相比于传统单T线模式的平均回收率（97.12%-107.50%）和CV（低于8.73%）,双T线模式的平均回收率（104.50%-137.88%）和CV（低于12.46%）更差,因此可能影响产品的正确度和精密度。综上所述,传统单T线模式QBs-LFIA的正确度和精密度更高,而双T线模式QBs-LFIA的时间成本更低,货架期稳定性更高,这为提高产品的性能提供了科学依据。综上所述,本研究基于抗DON单克隆抗体开发了一种QBs-LFIA用于玉米和大豆中DON的快速、灵敏检测,为粮食中DON的快速检测提供了技术保障。此外,通过比较传统单T线模式与双T线模式对LFIA分析性能的影响,为产品的商业化提供科学依据。
其他文献
乳酸菌主要存在于乳制品、发酵的肉和鱼、酸面团和自然发酵果蔬等营养丰富的环境中,因其具有较好的抗炎、抗氧化等功能,而被广泛用于多种疾病防治的研究。过度饮酒是肝脏发病率升高和死亡人数占比增加的重要因素,许多成年男性都会饮酒,长期过度饮酒会诱导机体氧化应激反应增加,并导致肝脏损伤。本研究旨在从不同来源的传统发酵食品中筛选出一株具有较高抗氧化活性和益生性能的乳酸菌,并探究该乳酸菌缓解小鼠酒精性肝损伤的机制
多酚（PP）是一种大量存在于植物和水果中的营养物质,具有抗衰老,抗炎症,抗肿瘤等多种功效,在维护人体健康,降低患病风险方面具有巨大的潜力。PP一般被分为游离多酚和结合多酚（BP）两种,游离多酚得到了大多数人的关注,但是BP也具有了不容忽视的价值。BP常常与膳食纤维（DF）,蛋白质等大分子物质通过化学键位连接,把BP与大分子物质分开的传统提取方法一般为酸水解法,碱水解法和酶水解法,传统方法各具优势,
天然淀粉分布广泛,主要存在于植物的种子、茎和根中,能够赋予食品和非食品独特的功能特性,淀粉被广泛应用于食品和非食品行业。在食品工业中具有重要的功能特性和营养特性。为改善淀粉的性能、扩大其应用范围,利用物理、化学或酶法处理,在淀粉分子上引入新的官能团或改变淀粉分子大小和淀粉颗粒性质,从而改变淀粉的天然特性。近年来,亲水胶体具有良好的持水性、凝胶性、稳定性、增稠性等特点,被广泛的应用于淀粉改性,以改善
高尿酸血症是生物体内嘌呤代谢紊乱导致的体内尿酸含量高于正常值的生理代谢性疾病。黄嘌呤氧化酶（Xanthine oxidase,XOD）是人体内催化黄嘌呤和次黄嘌呤生成尿酸的关键酶,是治疗高尿酸血症的作用标靶。相比于临床上治疗高尿酸血症的一线西药而言,自然界的黄酮类化合物更加温和、安全、廉价,且药理作用广泛,是抑制XOD活性的潜在抑制剂。一般来说,葡萄糖基、羟基和甲氧基是黄酮类化合物的重要取代基,取
食品安全问题是关系民众健康和国计民生的重大问题,也是影响我国食品工业发展的主要因素之一。当今影响食品安全的因素众多,但由病原微生物引起的食源性疾病依然是世界最为突出的公共卫生问题之一。低温预制食品,也称为即食食品（RET-food）,可在不加热或简单加热后直接食用。因此,该类食品极易发生因病原菌污染引起的食物中毒事件。单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes,L.M.）是
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阳性细菌,经常污染蔬菜、肉类等食品,严重威胁人们的生命健康。因此,建立准确有效的检测方法对于监控和预防S.aureus引起的食品安全问题具有重要意义。但复杂的食物基质会严重影响检测方法的灵敏度和准确度,而将磁分离（Magnetic separation,MS）等前处理技术应用于样本的前处理
苯二氮卓类药物（Benzodiazepines,BZD）是临床上常用的镇静安眠类处方药,包含20多种衍生物。近年来,苯二氮卓类药物作为镇静剂和抗应激药物被违法添加在饲料中并应用于畜禽养殖过程,在动物性食品中残留会对人类健康造成严重危害。中国农业部严禁在动物饲料和饮用水中添加地西泮、硝西泮和奥沙西泮等多种结构类似的同系药物。目前对苯二氮卓类药物的检测以仪器检测法为主,方法灵敏度高但操作复杂、仪器昂贵
食物过敏已成为世界关注的食品安全问题。近年来,膳食干预开始受到食物过敏患者的青睐。许多研究表明体内肠道菌群失调是引发食物过敏的重要原因之一。因此,以调节肠道菌群平衡为切入点是膳食干预食物过敏的主要策略。益生元和益生菌具有调节肠道菌群平衡的作用,并对食物过敏产生重要影响。乳酸菌作为一类重要的益生菌,目前,它干预食物过敏的作用也备受关注。大豆营养丰富,除蛋白质和油脂外,还含有低聚糖、卵磷脂和大豆异黄酮
脐橙果皮（NOP）是膳食纤维（DF）与多酚的良好来源,但通常作为工业废弃物被丢弃,造成严重的环境和生态问题。目前,提取结合多酚（BP）常用酸、碱水解或酶解等方法,然而这些方法不仅产率低,还容易使BP发生降解。固态发酵（SSF）是一种能有效提高食品营养价值的技术,此外,混菌固态发酵可弥补单菌条件下酶系统不完善的缺点,这有助于DF中BP的释放。本课题建立了一种里氏木霉和黑曲霉混菌SSF释放BP的可行方