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背景:肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是全世界范围内日益严重的恶性肿瘤之一,其发病率以及死亡率分别位于所有癌症类型中的第六位和第四位,存在疗效有限,预后差等问题。特别是在中晚期肝癌方面,手术治疗一般存在较大问题。索拉菲尼(Sorafenib)是晚期肝癌的一线临床用药,是一种多激酶抑制性的多靶向性口服用药。乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是诱导肝癌的主要诱因,HBx(Hepatitis B virus X protein)是由HBV基因组编码的重要多功能调节蛋白,被认为是诱导肝癌形成的主要诱导因子。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度约200bp以上的非编码蛋白质功能的RNA分子。本实验室前期通过高通量LncRNA芯片筛查出受HBx诱导的lncRNA差异表达谱,从中发现LncRNA TRERNA1在肝癌细胞中高表达,推测HBx诱导的LncRNA TRERNA1可能与HCC的发生发展相关。研究目的:探究HBx诱导的lncRNA TRERNA1对肝癌细胞的增殖能力和索拉非尼药物敏感性的影响,进一步寻找lncRNA TRERNA1对索拉非尼药物敏感性影响可能的机制。研究方法:首先通过RNA原位杂交技术实验,在110例HCC临床病例肿瘤组织及癌旁组织中检测lncRNA TRERNA1的表达水平,分析TRERNA1的表达水平是否与HCC的发生发展具有相关性。通过患者部分病理数据分析TRERNA1的表达水平与HCC的预后相关性。采用过表达TRERNA1-pcDNA3.1载体转染HCC细胞系HepG2构建TRERNA1的HCC细胞模型,慢病毒TRERNA1 siRNA载体转染HCC细胞系HepG2.215(可表达HBV病毒基因组)构建稳定敲低TRERNA1表达的HCC细胞模型。CCK-8法和平板克隆实验分析TRERNA1对HCC细胞的增殖能力的影响。CCK-8法检测HCC细胞的存活率的变化,并评估HCC细胞TRERNA1表达水平对肝癌靶向药物索拉非尼治疗的敏感性。RNA-seq测序分析技术筛选敲减TRERNA1所诱导的基因是否与癌症相关的信号通路有关,并以Western Blot方法验证。肿瘤基因图谱数据库分析(Cancer GenomeAtlas,TCGA)分析由敲减TRERNA1诱导的15个Wnt信号通路相关基因与肝癌的相关性,通过qPCR在过表达TRERNA1的HepG2细胞与敲减TRERNA1的HepG2.215中验证RNA-seq结果,以确定候选的由敲减TRERNA1诱导显著上调的Wnt信号通路相关基因。采用western blot实验检测过表达TRERNA1的HepG2细胞及敲低表达HepG2.215细胞中Wnt信号通路关键分子β-catenin在细胞核中的蛋白水平,确定TRERNA1是否参与调控Wnt信号通路。采用Western Blot实验检测Wnt信号通路下游经典的癌症相关靶蛋白的表达情况,进一步确定TRERNA1通过Wnt信号通路上调哪些相关基因影响索拉非尼药物的敏感性。研究结果:1)通过RNA原位杂交分析HCC组织芯片结果表明,在HCC肿瘤组织中TRERNA1的表达水平高于癌旁组织,具有显著相关性(P=0.0294)。2)通过对HCC患者5年生存期数据分析结果表明,TRERNA1的表达水平高低与HCC患者预后生存率具有显著相关性(P=0.0084),高表达TRERNA1的HCC患者预后生存期小于低表达HCC患者。3)过表达和敲减TRERNA1的HCC细胞增殖实验结果表明,TRERNA1能够促进HCC细胞的增殖及克隆形成能力。4)索拉非尼药物敏感性实验结果表明,TRERNA1高表达能够明显降低了HCC细胞对索拉非尼药物处理的敏感性。5)敲减TRERNA1的HepG2.215细胞的RNA-seq结果数据表明,敲减TRERNA1能够显著促进Wnt信号通路(15个基因)等肿瘤相关信号通路基因表达上调。6)TCGA数据库与qPCR实验验证RNA-seq结果表明,TRERNA1的敲减能够提高Wnt信号通路拮抗因子SFRP1、SFRP5(分泌型卷曲相关蛋白1、5)的表达。7)TRERNA1的过表达能够提高β-catenin在细胞核中的蛋白水平,能够有效的促进Wnt信号通路的上调,从而促进Wnt相关下游靶分子c-JUN、c-myc、CD44、cyclinD1的表达。结论:1.TRERNA1高表达与HCC的预后不良有关。2.过表达TRERNA1促进HCC细胞增殖能力。3.TRERNA1通过抑制SFRP1、SFRP5的表达,调节Wnt信号通路,激活Wnt下游的c-JUN、c-myc、CD44、cyclinD1蛋白,促进肝癌细胞的增殖以及降低对索拉非尼的药物化疗敏感性。