【摘 要】
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目的:探讨亚砷酸钠（NaAsO2）对小鼠神经干细胞（NE-4C细胞）增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响及其可能凋亡机制。方法:体外培养NE-4C细胞,分别以0（对照）、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2μmol/L亚砷酸钠干预48h。CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构的变化;Transwell及划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡及细胞内Ca2+水平的变化情
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目的:探讨亚砷酸钠（NaAsO2）对小鼠神经干细胞（NE-4C细胞）增殖、迁移和凋亡等生物学行为的影响及其可能凋亡机制。方法:体外培养NE-4C细胞,分别以0（对照）、0.4、0.8、1.6、2.4、3.2μmol/L亚砷酸钠干预48h。CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构的变化;Transwell及划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡及细胞内Ca2+水平的变化情况;激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS水平变化;RT-PCR及Western blotting技术检测细胞凋亡、内质网应激及自噬相关基因和蛋白表达水平变化。结果:CCK-8检测结果显示,各剂量组细胞存活率随亚砷酸钠浓度升高而降低,呈时间-剂量效应关系（P＜0.05）;透射电镜观察细胞超微结构,与对照组相比0.4、0.8μmol/L组细胞器形态正常,未见明显损伤,1.6、2.4及3.2μmol/L组线粒体、内质网结构肿胀紊乱,细胞内自噬小体增多,随剂量增加变化明显;Transwell实验及划痕实验发现,细胞迁移能力随亚砷酸钠浓度的增高而降低（P＜0.05）;亚砷酸钠干预可影响细胞周期,其中G1期细胞占比降低（P＞0.05）,S期细胞所占比例降低（P＜0.05）,G2期细胞占比增加（P＜0.05）,细胞周期在G2/M期出现阻滞;细胞凋亡率随亚砷酸钠浓度的增高逐渐增加（P＜0.05）;细胞内ROS平均荧光强度及Ca2+水平随亚砷酸钠干预浓度增加而升高（P＜0.05）;RT-PCR及Western blotting结果显示,Caspase-3、Bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平受亚砷酸钠干预呈上调趋势（P＜0.05）,Bax mRNA及蛋白的表达水平未见明显变化（P＞0.05）;亚砷酸钠干预后内质网应激相关基因Atf6、Ire1 mRNA表达水平呈上升趋势（P＜0.05）,Perk mRNA表达水平未见趋势变化（P＜0.05）;Grp78、Caspase-12及Chop mRNA表达水平随亚砷酸钠浓度升高而升高（P＞0.05）,内质网应激相关蛋白GRP78、Caspase-12及CHOP的表达水平随亚砷酸钠浓度升高而呈上升趋势（P＜0.05）;亚砷酸钠干预后,自噬基因LC3 mRNA表达量上升（P＜0.05）,自噬相关蛋白Beclin-1、ATG5及LC3-Ⅱ的表达均呈上升趋势（P＜0.05）。结论:亚砷酸钠可抑制NE-4C细胞的增殖及迁移能力,诱导细胞周期阻滞于G2/M期,使细胞凋亡率升高,其机制可能是通过提高细胞内ROS和Ca2+水平,诱导细胞发生内质网应激及自噬进而诱导细胞凋亡的发生。
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