【摘 要】
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苹果色泽是一项影响其商品性的重要指标。花青苷的合成积累与果皮着色密切相关,MdMYB1作为调控基因影响着花青苷的合成,研究发现MdMYB1启动子的甲基化对果皮着色有抑制作用。本试验利用前期对绿色品种‘澳洲青苹’的分析研究所得到的甲基化关键区段-1062～-964 bp（A）、-2026～-1870 bp（B）和-1898～-1633 bp（C）,分别构建了三个缺失试验区段的MdMYB1启动子,通过
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苹果色泽是一项影响其商品性的重要指标。花青苷的合成积累与果皮着色密切相关,MdMYB1作为调控基因影响着花青苷的合成,研究发现MdMYB1启动子的甲基化对果皮着色有抑制作用。本试验利用前期对绿色品种‘澳洲青苹’的分析研究所得到的甲基化关键区段-1062～-964 bp（A）、-2026～-1870 bp（B）和-1898～-1633 bp（C）,分别构建了三个缺失试验区段的MdMYB1启动子,通过农杆菌侵染本氏烟草叶片和‘粉红女士’果皮以验证其功能;在此基础上,以不同色泽类型的十个苹果品种（红色品种‘新红星’、‘岳帅’、‘秦阳’、‘华冠’,绿色品种‘岱绿’和‘印度’,黄色品种‘瑞雪’、‘王林’、‘金富’、‘金钟’）为试验材料,对果实套袋处理后的色泽参数、主要色素含量及MdMYB1启动子三个区段甲基化水平的进一步分析,由此阐明MdMYB1启动子甲基化对花青苷合成及果皮着色的影响。主要的研究结果如下:1.本实验成功完成了对三个甲基化区段的缺失,并得到了携带重组MdMYB1启动子的农杆菌,在侵染烟草叶片和苹果果皮后,分析其GUS活性以及外观表征发现:甲基化区段A和B的缺失降低了MdMYB1启动子的表达活性,使得烟草叶片GUS染色效果较差,果皮侵染部位基本不着色,与对照部位差异较为明显;而缺失区段C的启动子MdMYB1-C与MdMYB1启动子的在烟草叶片的表现和活性并无显著差异,并且两者在苹果果皮组织中的过表达提高了花青苷的合成与积累,使得试验部位着色程度高于未侵染部位;这与烟草叶片的GUS活性和染色效果表现一致。由此可以得出,区段A和区段B影响着果皮中的花青苷合成积累,与果皮着色密切相关;而缺少区段C的启动子表现出与MdMYB1启动子相似的功能,因此其可能不是MdMYB1启动子与果皮着色密切相关的甲基化关键区段。2.对不同色泽类型苹果品种MdMYB1启动子甲基化区段的修饰水平分析发现,不同色泽类型苹果品种的关键甲基化区段是存在差异的:三个试验区段于绿色品种中均为关键性的甲基化区段;但与黄色品种果皮的着色没有显著相关性;此外,与红色品种花青苷合成密切相关的是甲基化区段A,区段C可能不是关键性的甲基化区段,而区段B的功能性因品种不同而有所差异:区段B在‘新红星’和‘华冠’品种中与果皮着色密切相关,但与‘秦阳’和‘岳帅’却没有显著的相关性。
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