目的:1型糖尿病(Type 1 diabetes mellitus,T1DM)是致病性T淋巴细胞介导的胰岛β细胞进行性破坏为特征的自身免疫性疾病,占糖尿病的5%-10%,半数患者为青少年,依赖外源性胰岛素治疗。胰岛β细胞在遗传易感性的基础上,由于环境因素(病毒感染、牛奶喂养、应激)的诱发作用,产生胰岛炎症和β细胞破坏,胰岛β细胞被破坏后存在于胰岛β细胞内的自身抗原释放后产生胰岛自身抗体。1974年首次报道了胰岛细胞胞浆抗体(islet-cell cytoplasmic autoantibody,ICA),此后胰岛细胞自身抗体与T1DM的关系开始引起广泛关注。锌转运体8自身抗体(Zinc transporter 8 autoantibody,ZnT8A)是新近发现的胰岛β细胞自身抗体,其在T1DM的诊断和分型中具有重要的价值。成人隐匿性自身免疫性糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults,LADA)属于免疫介导T1DM亚型,早期临床表现酷似2型糖尿病(Type 2 diabete mellitus,T2DM),诊断后至少6个月不需要胰岛素治疗,最终因胰岛β细胞缓慢破坏而依赖外源性胰岛素治疗。LADA China多中心协作研究显示18岁以上初诊的T2DM患者中LADA患病率约6.1%,但其胰岛功能的衰减速度是T2DM的3倍,自发性糖尿病酮症酸中毒(diabetic ketoacidosis,DKA)一般在发病半年到一年后出现,说明正确诊断并及时胰岛素治疗LADA非常重要。在疾病的发展过程中,ZnT8A会受到残存的胰岛β细胞数量及功能的影响,因此ZnT8A值得密切关注和监测。此外,除外年龄因素影响,T1DM患者一级亲属中ZnT8A阳性者74%的人在5年内发展为糖尿病,因此ZnT8A对T1DM的风险预测有重要价值。对高风险个体应该进行筛选和监控,一旦发现血糖异常,及时进行早期治疗,以保护残存的胰岛β细胞功能。当前ZnT8A的检测广泛采用放射配体法(Radio-Binding assay,RBA),但是其在多数实验室不易实施。2014年8月20日美国食品和药物管理局首次批准了酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)可用于测定ZnT8A。本研究采用ELISA测定ZnT8A,旨在探讨ZnT8A在T1DM中的诊断价值。方法:1 依据1999年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)糖尿病诊断标准,2014年1月-2015年12月选取在我院内分泌1科住院的糖尿病病人194例,包括初诊时血清谷氨酸脱酸酶自身抗体(glutamic acid decarboxylase autoantibodies,GADA)阳性的T1DM病人84例,其中男性50例,女性34例,中位数年龄33岁,最小年龄13岁,最大年龄73岁,中位数病程6年,最短病程7天,最长病程25年;初发T2DM病人110例,其中男性69例,女性41例,平均年龄49.32±13.61岁,最小年龄19岁,最大年龄84岁。另设正常对照组(normal controls,NC):选取我院同期常规体检的健康人102名,其中男性53名,女性49名,中位数年龄38.5岁,最小年龄15岁,最大年龄66岁,排除心、脑、肝、肾等慢性疾病及其他内分泌疾病。受试者均禁食12小时后抽取静脉血两管各4ml,一管用于生化指标的检测,另一管分装于Eppendorf管,保存在一20℃冰箱,用于ZnT8A和GADA的检测。2 ELISA测定血清ZnT8A。3 放射免疫分析法(Radioimmunoassay,RIA)测定血清GADA。4 临床指标的测定4.1 测量身高、体重、腰围、臀围、收缩压(systolic blood pressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)。4.2 全自动生化分析仪测定总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)。免疫比浊法测定糖化血红蛋白(hemoglobin A1c,Hb A1c)百分比。5 统计学处理:应用SPSS13.0软件进行分析,计量资料数据用均数±标准差((?)±s)、中位数或四分位数间距表示,计数资料用阳性例数、构成比或者率表示;计量资料正态分布者采用两个独立样本t检验;偏态分布者两个独立样本比较采用Mann-Whitney U检验,多个独立样本比较采用Kruskal-Wallis H检验;计数资料组间比较采用χ~2检验,若某一格的期望值<5则采用Fishers确切概率法。P<0.05认为差异有统计学意义。结果:1 T1DM组、T2DM组和NC组ZnT8A的浓度中位数分别是13.71U/ml、6.33 U/ml和2.02 U/ml,差异有统计学意义(χ~2=147.640,P<0.01),T1DM组ZnT8A浓度高于T2DM组和NC组(Z分别为-9.710和-9.623,均P<0.01),T2DM组ZnT8A浓度高于NC组(Z为-7.279,P<0.01)。ZnT8A阳性率分别是23.8%(20/84),0%(0/110)和1%(1/102),差异有统计学意义(χ~2=49.719,P<0.01),T1DM ZnT8A阳性率显著高于T2DM组和正常对照组(分别χ~2=29.201和23.970,均P<0.01),T2DM组和NC组阳性率无统计学差异。三组GADA的浓度中位数分别是1.91 U/ml,0.066U/ml和0.063 U/ml,差异有统计学意义(χ~2=147.570,P<0.01),T1DM组较T2DM组和NC组GADA的浓度更高(Z分别为-10.965和-10.421,均P<0.01),T2DM组和NC组GADA浓度无统计学差异。T1DM组在GADA阳性的基础上联合检测ZnT8A后自身抗体阳性率由58.3%(49/84)变为67.9%(57/84),阳性率增加9.6%。2 经典T1DM组(初诊年龄<18岁)和LADA组(初诊年龄≥18岁)ZnT8A浓度中位数是13.40 U/ml和13.71 U/ml,无统计学差异。ZnT8A阳性率分别是40%(8/20)和18.8%(12/64),亦无统计学差异。两组GADA浓度中位数是1.20 U/ml和3.14 U/ml,LADA组GADA浓度更高(Z为-2.107,P<0.05),两组GADA的阳性率分别是50%(10/20)和60.9%(39/64),无统计学差异。检测GADA的基础上联合ZnT8A后自身抗体的阳性率经典T1DM组由50%(10/20)变为65%(13/20),阳性率增加15%,LADA组由60.9%(39/64)变为68.7%(44/64),阳性率增加7.8%。3 T1DM组根据初诊年龄分为年龄<18岁组、18岁≤年龄<30岁组和年龄≥30岁组三组。ZnT8A的浓度中位数分别是13.40 U/ml、14.74 U/ml和13.59 U/ml,差异有统计学意义(χ~2=6.901,P<0.05),18岁≤初诊年龄<30岁组较初诊年龄≥30岁组ZnT8A的浓度更高(Z为-2.263,P<0.01);年龄<18岁组与18岁≤初诊年龄<30岁组、初诊年龄≥30岁组无差异。三组ZnT8A的阳性率分别是40%(8/20)、50%(10/20)和4.5%(2/44),差异有统计学意义(χ~2=19.454,P<0.01),初诊年龄<18岁组和初诊18≤初诊年龄<30岁组ZnT8A阳性率显著高于初诊年龄≥30岁组(分别χ~2=10.559和15.784,P<0.01)。初诊年龄<18岁组和18≤初诊年龄<30组差异无统计学意义。三组GADA的浓度中位数分别是1.20 U/ml、0.53U/ml和6.9 U/ml,差异有统计学意义(χ~2=16.911,P<0.01),初诊年龄≥30岁组较初诊年龄<18岁组、18岁≤初诊年龄<30岁组GADA的浓度更高(Z值分别为-3.217、-3.391,均P<0.01),初诊诊年龄<18岁组与18岁≤初诊年龄<30岁组无差异。三组GADA的阳性率分别是50%(10/20)、40%(8/20)和71.5%(31/44),差异无统计学意义。4 T1DM组根据病程分为病程<1年组、1年≤病程<5年组和病程≥5年组三组,三组ZnT8A浓度中位数分别是13.54 U/ml、14.04 U/ml和13.42U/ml,无统计学差异。三组ZnT8A的阳性率分别是33.3%(6/18)、21.4%(3/14)和21.2%(11/52),无统计学差异。三组GADA的浓度中位数分别是2.15 U/ml、0.85 U/ml和2.13 U/ml,无统计学差异。三组GADA的阳性率分别是55.6%(10/18)、50%(7/14)和61.5%(32/52),亦无统计学差异。5 T1DM组根据BMI分为BMI<24kg/m~2、24 kg/m~2≤BMI<28 kg/m~2和BMI≥28 kg/m~2分为三组,三组ZnT8A浓度的中位数分别是13.78U/ml、13.44U/ml和14.27U/ml,无统计学差异。三组ZnT8A阳性率分别是25.8%(17/65)、23.1%(3/13)和0%(0/6),无统计学差异。三组GADA的浓度分别是2.35 U/ml、0.69 U/ml和0.09 U/ml,差异有统计学意义(χ~2=8.978,P<0.05),BMI<24 kg/m~2组、24 kg/m~2≤BMI<28 kg/m~2组较BMI≥28 kg/m~2组GADA浓度更高(Z分别为-2.834和-2.923,均P<0.01),24 kg/m~2≤BMI<28 kg/m~2和BMI<24kg/m~2组GADA浓度无差别。三组GADA的阳性率分别是68.2%(45/66)、30.8%(4/13)和0%(0/5),差异亦有统计学意义(χ~2=15.49,P<0.01),BMI<24kg/m~2组GADA阳性率显著高于BMI≥28kg/m~2组(χ~2=7.486,P<0.01),24 kg/m~2≤BMI<28 kg/m~2与其余两组比较GADA的阳性率无差别。6 T1DM组分成单一GADA阳性组、单一ZnT8A阳性组、GADA或ZnT8A阳性组和GADA且ZnT8A阳性组四组,四组阳性率分别是44.0%(37/84)、9.5%(8/84)、67.9%(57/84)和14.3%(12/84),差异有统计学意义(χ~2=83.748,P<0.01)。GADA或ZnT8A组阳性率显著高于单一GADA组、单一ZnT8A组和GADA且ZnT8A组的阳性率(分别χ~2=9.661、60.249和49.802,均P<0.001);单一GADA组阳性率显著高于单一ZnT8A组、GADA且ZnT8A组的阳性率(分别χ~2=25.526和18.007,均P<0.001);GADA且ZnT8A组阳性率与单一ZnT8A组阳性率无统计学差异。7 ROC曲线分析ZnT8A的敏感度和特异度分别是23.8%和99%(阳性切点值是15 U/ml),曲线下面积是0.91(95%CI,0.87-0.95)。8 T1DM组分为ZnT8A阳性组和ZnT8A阴性组,两组比较ZnT8A阳性组中位数年龄、初诊年龄更小(Z分别为-3.268和-3.496,均P<0.01),Hb A1C、FBG更高(t为2.670、Z为-2.621,分别P<0.01、P<0.05),更容易发生酮症(χ~2=6.159,P<0.05)。而性别、家族史、病程、BMI、WHR、SBP、DBP、胰岛素用量、TC、TG、LDL-C、HDL-C两组间比较无差异。结论:1 ZnT8A ELISA特异度强,简便易行,在临床上可作T1DM的早期筛查和分型诊断指标。2 ZnT8A在年轻的初发糖尿病的鉴别诊断中具有重要价值。3 ZnT8A和GADA联合检测增加了T1DM诊断率。