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本论文以具有广谱性的氨基甲酸酯类杀虫剂——西维因为检测对象,根据免疫分析检测原理,分别采用了辣根过氧化物酶和胶体金为标记示踪物,研究开发了适用于现场快速检测的试纸条。 Dipstick和flow-through两种形式的酶标记快速检测试纸条,以带正电尼龙膜(Millipore)为固相载体,辣根过氧化酶标记的西维因半抗原为检测标记物,采用直接竞争酶联免疫吸附方式对西维因进行快速检测。通过抗体和酶标抗原的优化分析,确定西维因抗体的包被量为1.0μg,西维因的酶标抗原的稀释度为1:100000。两种酶标记快速检测试纸条对西维因的最低检测限为10μg/L。 Flow-through和Lateral-flow两种形式的金标记快速检测试纸条,以硝酸纤维素膜为固相载体,胶体金标记的西维因抗体为检测标记物,对西维因进行快速检测。优化结果确定的实验条件为:西维因半抗原-OVA连接物的包被量为1.0μg,金标记西维因抗体与西维因反应时间为5分钟,金标记抗体与西维因的混合比例为:flow-through为1:3,lateral-flow为1:2。Flow-through金标记试纸条对西维因的最低检测限为50μg/L,而lateral-flow金标记试纸条对西维因的最低检测限为100μg/L。 以小油菜、大米、大麦、苹果和梨为实际样品(经HPLC检测为阴性样品)进行西维因标准添加实验,样品加5倍体积的甲醇,手摇5分钟提取西维因。样品提取液用基质掩蔽剂稀释一定的倍数后,直接用试纸条法快速检测,同时样品的提取液通过固相萃取柱净化后用高效液相进行检测,测得的实际样品的回收率均在60%以上。通过用HPLC方法验证试纸条检测方法的有效性,检测结果表明两者的相关性一致。 通过将西维因的酶标抗原和金标记西维因于4℃和37℃放置七天,隔天进行一次实验,结果表明金标记抗体的稳定比较酶标抗原稳定性好。 试纸条法快速检测技术可作为一种适用于现场大批量筛选,半定量或定性检测的工具。