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目的:人们对预防糖皮质激素诱导骨质疏松及骨折的意识正逐渐增加,然而,糖皮质激素的非创伤性骨坏死并发症却经常被忽略。本文主要探讨地塞米松处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1后凋亡和自噬的发生情况以及自噬和凋亡的关系。 方法: (1)培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1。 (2)不同浓度地塞米松(对照组,10-10mol/L,10-9mol/L,10-8mol/L,10-7mol/L,10-6mol/L,10-5mol/L,10-4mol/L)处理MC3T3-E1细胞24小时后,使用MTT试剂盒检测MC3T3-E1细胞增殖活性。 (3)使用流式细胞仪检测地塞米松处理后细胞凋亡发生情况,并使用蛋白质免疫印迹(Western Blot)检测凋亡相关蛋白(PARP)的表达情况。使用流式细胞仪检测活性氧ROS产生情况,并使用Western Blot免疫印迹技术检测内质网应激蛋白(ATF4和CHOP)的表达情况。 (4)通过自噬相关蛋白(LC3、Beclin-1)的检测来观察自噬发生情况。 (5)观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)不同处理分组对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响;观察3-甲基腺嘌呤(3-MA)不同处理分组对MC3T3-E1细胞增殖活性的影响;并检测上述凋亡和自噬相关蛋白表达量的变化。 结果: (1)地塞米松抑制MC3T3-E1细胞增殖活性 (2)地塞米松诱导MC3T3-E1细胞凋亡 (3)地塞米松诱导MC3T3-E1细胞活性氧ROS产生及内质网应激发生 (4)地塞米松诱导MC3T3-E1细胞自噬 (5)地塞米松可通过活性氧ROS介导MC3T3-E1细胞凋亡和自噬的发生 (6)地塞米松诱导的细胞自噬可能通过氧化应激促进细胞凋亡的发生 结论:地塞米松可诱导小鼠成骨细胞MC3T3-E1程序性细胞死亡的发生,如凋亡和自噬,其中自噬可能通过氧化应激促进凋亡的发生。