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背景与目的:世界人口正面临严重的老龄化问题,但由于人类生命周期较长,机体老化是缓慢渐进的,因而不易研究,但基因突变可能引起机体老化加速和一些生理功能障碍,从而出现早衰,因此利用早老病人揭示正常衰老过程的分子机制具有重要的现实意义。Hutchinson-Gilford progeria syndrome(HGPS)是一种罕见的儿童早老症,主要由A型核纤层蛋白(laminA)突变蛋白progerin的表达引起。蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,是1954年第一个被发现的蛋白激酶,其在细胞生存、发育、增殖及凋亡过程中具有重要功能。最近研究表明,在复制性衰老、H2O2或IR诱发的衰老细胞中CK2α和(或)CK2α的mRNA和蛋白表达水平明显下降,本研究拟初步探讨CK2α亚基在prelamin A和progerin诱导的细胞早衰中的作用。
方法:采用RT-PCR和Real-time PCR等方法检测CK2α亚基在HEK293以及HEK293PLA、HEK293LA△50和HEK293LA细胞中mRNA转录水平;Western blotting检测CK2α亚基以及衰老相关蛋白P53、P21和P16在HEK293以及HEK293PLA、HEK293LA△50和HEK293LA细胞中的蛋白表达水平;构建pDsRed1-N1-CK2α融合表达载体与pEGFP-N1-UbA52融合表达载体,分别转染人胚肾细胞(HEK293),荧光显微镜观察各自的定位情况;将构建的pEGFP-N1-UbA52和pDsRed1-N1-CK2α融合表达质粒共转染HEK293细胞,荧光显微镜下观察CK2α亚基与UbA52共定位情况。
结果:与HEK293细胞相比,HEK293PLA细胞中CK2α亚基的mRNA和蛋白水平下降,而HEK293LA△50细胞中表达升高;HEK293PLA和HEK293LA△50细胞中P53、P21和P16的蛋白表达升高,而HEK293LA细胞中表达下降。成功构建原核表达载体pDsRed1-N1-CK2α,细胞定位观察结果表明CK2α亚基弥散性分布在整个细胞,UbA52主要定位于细胞核,它们在细胞中共定位。
结论:HEK293PLA细胞中CK2α亚基的mRNA和蛋白水平较HEK293细胞下降,而HEK293LA△50细胞中mRNA和蛋白水平升高,提示CK2α亚基可能在prelaminA和progerin堆积的细胞中有不同的作用,还有待进一步研究。CK2α亚基和UbA52在HEK293细胞存在共定位,提示它们在体内可能有相互作用。