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目的：在非小细胞肺癌中，低氧诱导因子1α（Hypoxia-inducible factor1α，HIF-1α）是一个重要的血管生成调节因子，为了探讨HIF-1αmRNA在克唑替尼诱导棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性大细胞淋巴瘤激酶（echinoderm microtubule associated protein like4-anaplastic lymphomakinase，EML4-ALK）阳性肺腺癌细胞株H2228凋亡的作用机制，本实验拟用一种酪氨酸激酶抑制剂克唑替尼（crizotinib）诱导EML4-ALK阳性肺腺癌细胞H2228细胞凋亡，观察肺癌细胞生长和凋亡情况，随后检测AKT/HIF-1α/VEGF通路相关指标mRNA表达水平变化，进一步探索克唑替尼诱导肺癌细胞凋亡中HIF-1αmRNA的重要作用，为今后酪氨酸激酶抑制剂的作用机制提供理论依据和分子生物学参考。方法：1、采用10、30、90、270、810nM浓度梯度的克唑替尼处理H2228细胞48h，利用MTT比色法测定细胞增殖能力，了解克唑替尼对细胞的增殖抑制作用。2、100、200、300nM克唑替尼处理H2228细胞48h，通过Annexin V流式细胞仪检测凋亡细胞，了解克唑替尼诱导细胞凋亡的作用。3、采用50、100、200、400、800μm/L浓度的低氧模拟剂氯化钴（CoCl2）作用H2228细胞24h，观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。采用200μm/L浓度的氯化钴作用H2228细胞0、3、6、12、24、48h，通过逆转录PCR(reversetranscription-PCR, RT-PCR)方法观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。4、采用0、60、125、250、500、1000nM的克唑替尼处理H2228细胞24h，采用RT-PCR方法观察HIF-1α的mRNA表达水平变化。5、采用500nM克唑替尼分别处理常氧组（未经氯化钴处理）、低氧组（经氯化钴处理）细胞24h，通过RT-PCR方法检测HIF-1α以及其上游调控因子丝氨酸苏氨酸蛋白激酶Akt、下游靶基因血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）的mRNA表达水平变化。结果：1、随着克唑替尼药物浓度升高，细胞增殖抑制率逐渐升高，呈剂量依赖性，半增殖抑制浓度（IC50）为335nM。2、H2228细胞凋亡率随着克唑替尼浓度增加而升高，呈剂量依赖性。3、当氯化钴作用时间为6-48h或氯化钴浓度大于100μm/L，随着氯化钴浓度及作用时间的增加，HIF-1α的mRNA表达水平逐渐下降，呈剂量及时间依赖性，于200μm/L浓度时下降最明显。4、H2228细胞中HIF-1α的mRNA表达水平随着克唑替尼浓度的增加逐渐上升，至一定浓度后下降，但均高于对照组细胞。5、克唑替尼能上调H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达，下调VEGF的表达。并且与常氧组比较，低氧组中克唑替尼上调HIF-1αmRNA的作用更明显（P＜0.05）。结论：1、克唑替尼能抑制EML4-ALK阳性肺腺癌细胞株H2228细胞的增殖，同时能诱导H2228细胞的凋亡，呈时间和剂量依赖性。2、低氧模拟剂氯化钴能下调HIF-1α的mRNA表达，与以往延迟缺氧状态下HIF-1α表达变化一致。3、克唑替尼能上调H2228细胞HIF-1α、Akt的mRNA表达，下调VEGF的表达。在低氧状态下克唑替尼上调HIF-1αmRNA的作用更明显（P＜0.05）。4、HIF-1αmRNA的上调在克唑替尼诱导H2228细胞株凋亡过程中发挥重要作用，是关健转录活性分子。